Cromer、Knops、Indian血型系統(tǒng)基因多態(tài)性及蛋白功能研究.pdf

1、Cromer、Knops和Indian血型系統(tǒng)分別是國際輸血協(xié)會(ISBT)命名的第21、22和23號血型系統(tǒng)。國外研究機構(gòu)對這三種血型系統(tǒng)的研究在不斷深入，而我國還未見對這三種血型系統(tǒng)在中國人群中的調(diào)查報道。本文的首要目的在于建立針對Cromer、Knops、Indian血型系統(tǒng)基因檢測方法，研究中國人群中三種血型系統(tǒng)基因多態(tài)性情況。另外，Cromer血型蛋白DAF(CD55)和Knops血型蛋白CRl(CD35)同屬于補體調(diào)節(jié)蛋白（

2、Complement Regulatory Proteins，CRPs）家族，此家族還包括CD59。人體內(nèi)每天大約有1％紅細胞因老化而被清除，針對老化紅細胞觸發(fā)巨噬細胞識別和清除的機制有多種理論。本文的另一目的是通過檢測不同老化程度紅細胞表面CD55、CD35和CD59數(shù)量，老化紅細胞清除機制中調(diào)理性吞噬機制是否發(fā)揮重要作用。
　　 我們首先采用基因組測序結(jié)合序列特異性引物聚合酶鏈反應(yīng)( polymeraseschain rea

3、ction- sequence-specific primer, PCR-SSP)的方法在漢族、維吾爾族、土族、傈僳族和侗族中對Cromer、Knops和Indian三個血型系統(tǒng)進行基因篩查。結(jié)果對于Cromer血型系統(tǒng)和Indian血型系統(tǒng)僅在內(nèi)含子處發(fā)現(xiàn)了兩個多態(tài)性位點，而在Knops血型系統(tǒng)的第29外顯子區(qū)域檢出了2個多態(tài)性位點(A4646G和A4870G)，并計算出了其對應(yīng)在5個民族人群中的基因頻率，發(fā)現(xiàn)這兩個位點的基因頻率在不

4、同民族間的分布存在差異。之后我們又對Knops血型基因的全長cDNA進行了測序，以期發(fā)現(xiàn)新的多態(tài)性位點，結(jié)果發(fā)現(xiàn)中國人的CR1基因編碼區(qū)域存在已經(jīng)報道的12個單核苷酸多態(tài)性(Single NucleotidePolymorphisms，SNPs)。
　　 我們還利用毛細管分離將紅細胞(RBC)分為年輕RBC和年老RBC，并對RBC體外40C及370C保存一周進行體外老他。借助流式細胞術(shù)，檢測了紅細胞表面的CD35、CD55和CD

5、59數(shù)量，以及所吸附的自身抗體IgG的數(shù)量。另通過體外培養(yǎng)人單核細胞白血病(THP-1)細胞，對紅細胞進行吞噬。與毛細管分離的年輕紅細胞相比，年老紅細胞表面三種補體調(diào)節(jié)蛋白數(shù)量顯著下降，自身抗體IgG敏感性顯著增加。體外40C保存的紅細胞表面三種補體調(diào)節(jié)蛋白數(shù)量無顯著變化，370C保存的紅細胞表面數(shù)量CD55和CD59數(shù)量顯著降低，但自身抗體IgG結(jié)合量都無明顯變化。THP-1細胞對年老紅細胞表現(xiàn)出輕微吞噬，對年輕紅細胞不吞噬。

6、　　 總體上，本實驗一方面在沒有相應(yīng)抗體和中國人群相關(guān)數(shù)據(jù)的情況下，分析了三個稀有血型系統(tǒng)在中國漢族及幾個少數(shù)民族中的分布情況，建立了快速篩查Knops血型基因的PCR-SSP方法。另一方面，眾多關(guān)于紅細胞老化吞噬的研究中，多數(shù)針對自身抗體和關(guān)于非調(diào)理性吞噬的CD47，鮮見系統(tǒng)針對補體調(diào)節(jié)蛋白的研究。另外，還將毛細管離心和體外儲存的紅細胞，進行了比較，這也是本文的另一創(chuàng)新之處。
　　 紅細胞作為人體內(nèi)一種特殊的無核細胞，它的衰