魚精蛋白基因多態(tài)性與男性不育相關(guān)性研究.pdf

1、不孕不育已成為一個世界性問題，男女因素約各占一半。參與精子發(fā)生的基因超過4000個。染色質(zhì)聚集濃縮，組蛋白乙?；约昂诵◇w形成，涉及魚精蛋白(Protamine，PRM)，組蛋白(Histone)和過渡蛋白（transition nuclear protein,TNP）三者之間的嚴(yán)密調(diào)控機(jī)制，這一過程與精子發(fā)生密切相關(guān)。國內(nèi)外已有PRM基因多態(tài)性與男性不育相關(guān)性研究，但由于人種分布不同、樣本量大小等原因，結(jié)果不盡相同。為了探討PRM1

2、(rs35576928、rs737008、r2301365)、PRM2(rs2070923、rs1646022)和TNP1(rs62180545)這6個位點(diǎn)基因多態(tài)性(singlenucleotide polymorphism，SNP)與我國漢族男性不育關(guān)系，設(shè)計了本實(shí)驗(yàn)，為該疾病致病基因型風(fēng)險預(yù)測提供依據(jù)。
　　同時檢索已發(fā)表的PRM基因多態(tài)性和男性不育相關(guān)性研究，采用薈萃分析（Meta分析），對納入研究數(shù)據(jù)資料進(jìn)行分析、概括，

3、進(jìn)一步驗(yàn)證PRM基因多態(tài)性與男性不育相關(guān)性。
　　采用病例-對照研究方法，收集不育男性636例為病例組（其中544例無精子癥或極度少精子癥患者和92例其它類型不育癥患者），同時收集已生育且精液檢查正常男性442例為對照組，使用MassARRAYiPLEX GOLD基因分型檢測方法分析rs35576928(G/T)、rs737008(C/A)、rs2301365(C/A)、rs2070923(A/C)、rs1646022(C/G)、

4、rs62180545(A/G)6個SNPs等位基因和各基因型分布，利用卡方檢驗(yàn)（x2）和比值比(Odds Ratio，OR)分析與男性不育的相關(guān)性。
　　Meta分析則通過制定檢索策略、搜集與整理文獻(xiàn)以及提取資料，使用Stata11.0統(tǒng)計軟件，通過統(tǒng)計學(xué)方法合并計算OR值和95％可信區(qū)間(95％Confidence interval，95％ CI)，進(jìn)行異質(zhì)性和敏感性分析，繪制漏斗圖計算發(fā)表偏倚，獲得PRM基因多態(tài)性與男性不育相

5、關(guān)性的循證醫(yī)學(xué)結(jié)果。
　　實(shí)驗(yàn)結(jié)果:病例組與對照組平均年齡、禁欲天數(shù)無統(tǒng)計學(xué)差異。精液量、激素水平[睪酮(testosterone，T)、黃體生成素(luteinizing hormone，LH)和雌二醇（estrogen，E2）]，病例組與正常對照組的差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)，而精液pH值、PR值、卵泡刺激素(follicle-stimulating hormone，F(xiàn)SH)水平病例組與正常對照組有統(tǒng)計學(xué)差異（P＜0.0

6、5）。對照組6個基因多態(tài)性位點(diǎn)均符合Hardy-Weinberg遺傳平衡定律，提示對照樣本具有群體代表。Logistic回歸分析表明PRM1基因3個SNPs、PRM2基因2個SNPs和TNP1的1個SNPs不同基因型與男性不育未發(fā)現(xiàn)存在明顯相關(guān)性。單倍性分析表明在病例組和對照組比較，各種單倍型組合與男性不育均存在明顯的相關(guān)性。其中GCTCC、TCGGA和TCGGC三種單倍型組合是男性罹患不育一個危險因素。而GCTGC、TCGCA和TCG

7、CC三種單倍型組合是男性罹患不育一個保護(hù)因素。連鎖不平衡分析結(jié)果表明，rs737008和rs2070923這兩個基因位點(diǎn)在遺傳學(xué)上是99％存在連鎖效應(yīng)(D'=0.996，r2=0.970); rs2301365和rs2070923這兩個基因位點(diǎn)在遺傳學(xué)上是97％存在連鎖效應(yīng)(D'=0.979，r2=0.678); rs737008和rs2301365這兩個基因位點(diǎn)在遺傳學(xué)上是98％存在連鎖效應(yīng)(D'0.984，r2=0.701);而其他

8、位點(diǎn)之間無明顯連鎖效應(yīng)?；蚪换プ饔梅治鼋Y(jié)果也表明PRM1基因的rs737008和rs2301365與PRM2基因的rs1646022存在交互作用。且rs1646022/rs737008基因型為CGGT的男性罹患不育風(fēng)險是正常男性的1.58倍，而其他一些基因型卻是保護(hù)因素。
　　Meta分析結(jié)果:本研究共納入了7350名男性不育病人和6167名正常對照組男性，數(shù)據(jù)來源于13篇臨床病例-對照研究。分析顯示，rs2301365是男性罹

9、患不育癥的一個危險因素（for CA vs.CC: OR=1.27，95％ CI=1.04-1.56，P=0.022;for AA vs.CC: OR=1.66,95％ CI=1.07-2.58,P=0.024; for AA+ CA vs.CC: OR=1.32,95％ CI=1.08-1.60，P=0.006; for AAvs.CA+ CC: OR=1.53,95％CI=1.00-2.36,P=0.052; forAvs.C:OR

10、=1.28,95％CI=1.09-1.51,P=0.003);rs737008和rs1646022位點(diǎn)在亞洲人和對照組來源于人群(population based, PB)亞組中存在差異，是男性不育的一個保護(hù)因素，其他位點(diǎn)與男性不育則無相關(guān)性。統(tǒng)計結(jié)果顯示各模型中不存在異質(zhì)性，敏感性分析也無明顯統(tǒng)計學(xué)差異。漏斗圖、Begge's和Egger's檢驗(yàn)結(jié)果提示本研究不存在明顯發(fā)表偏倚，研究結(jié)果可靠。
　　實(shí)驗(yàn)研究表明，PRM1基因3個

11、SNPs、PRM2基因2個SNPs和TNP1基因1個SNP與男性不育無明顯相關(guān)性。亞組分析結(jié)果亦未發(fā)現(xiàn)各位點(diǎn)與男性不育存在相關(guān)性。GCTGC、TCGCA和TCGCC三種單倍型組合對男性罹患不育具有保護(hù)效應(yīng)，而GCTCC、TCGGA和TCGGC三種單倍型組合男性罹患不育的風(fēng)險為正常人群的2.03-5.73倍。PRM1基因的rs737008和rs2301365與PRM2基因的rs1646022存在交互作用。且rs1646022/rs7370

12、08基因型為CGGT的男性罹患不育風(fēng)險是正常男性的1.58倍，而其他一些基因型卻是保護(hù)因素。TNP1基因rs62180545與PRM1/2基因的5個SNPs均不存在交互作用。Meta分析表明，PRM15'-UTR區(qū)域的rs2301365位點(diǎn)在所有模型中是男性不育的一個危險因素。rs1646022位點(diǎn)是男性不育在亞洲和PB亞組中的主要模型中是保護(hù)因素。rs737008位點(diǎn)在PB亞組的主要模型中是男性不育的保護(hù)因素。然而，其他的SNPs和男