pre-B細(xì)胞中CTCF介導(dǎo)沉默子Sis和增強子Ei相互作用并抑制VJ重排.pdf

1、真核細(xì)胞基因表達的精確調(diào)控需要順勢調(diào)控元件之間以及順式調(diào)控元件和啟動子之間發(fā)生直接的相互作用，這種相互作用使得基因在特定的狀態(tài)下呈現(xiàn)特定的染色質(zhì)高級結(jié)構(gòu)。小鼠免疫球蛋白輕鏈kappa(Igκ)基因是研究細(xì)胞分化過程中染色質(zhì)高級結(jié)構(gòu)變化的理想模型。Igκ基因包含95個功能Vκ基因，4個功能Jκ基因，以及一個Cκ基因。目前已發(fā)現(xiàn)的Igκ基因順式調(diào)控元件包括沉默子Sis，位于內(nèi)含子區(qū)域的增強子(Ei)，3'增強子(E3')和下游增強子(Ed)

2、。前B細(xì)胞（pre-B細(xì)胞）中，Vκ基因帶著自身啟動子半隨機地重排到任意的Jκ區(qū)域，并起始轉(zhuǎn)錄。Sis和Ei具有調(diào)節(jié)VJ重排的功能，Sis通過將Igκ基因定位到異染色質(zhì)抑制VJ重排，而Ei通過促進“germline transcription”促進VJ重排。
　　 CCCTC位點結(jié)合蛋白CTCF具有高度保守的鋅指結(jié)構(gòu)，并在基因表達調(diào)控中有重要作用，如調(diào)控基因活化和沉默，參與基因印記等。此外CTCF還能介導(dǎo)形成染色質(zhì)內(nèi)部及染色質(zhì)之

3、間的相互作用。有報道推測在pre-B細(xì)胞中CTCF結(jié)合在Sis上，然而CTCF是否介導(dǎo)Igκ基因的染色質(zhì)高級結(jié)構(gòu)，是否調(diào)控VJ的重排依然不是很清楚。
　　 通過染色質(zhì)構(gòu)象捕獲技術(shù)(3C)我們發(fā)現(xiàn)在pre-B細(xì)胞中Sis與Ei之間發(fā)生直接的相互作用，Igκ基因形成一個染色質(zhì)環(huán)，而在pro-B細(xì)胞中則不存在這種直接的相互作用。通過shRNA下調(diào)CTCF的表達，我們發(fā)現(xiàn)Ei-Sis之間的相互作用消失，同時“germline trans