糖尿病大鼠穹窿下器室管膜細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察.pdf

1、目的：觀察糖尿病大鼠不同時(shí)期穹窿下器(SFO)的室管膜細(xì)胞的分泌情況和形態(tài)學(xué)變化以及NF-κB在SFO室管膜細(xì)胞中的表達(dá)情況。
　　 方法：選擇健康雄性Wistar大鼠60只，體重200g～220g，隨機(jī)分為四組：①對(duì)照組(n=15)：不做任何處理；②用藥2周組(n=15)；③用藥4周組(n=15)；④用藥8周組(n=15)。
　　 1.糖尿病動(dòng)物模型的制作Wistar大鼠腹腔注射鏈脲佐菌素(Streptozotocin

2、，STZ)，建立Ⅰ型糖尿病模型。
　　 2.光鏡標(biāo)本制備：常規(guī)經(jīng)心灌注、固定、取腦，冠狀方向去除視交叉以前和漏斗柄以后部分，取中間腦塊，常規(guī)石蠟包埋，連續(xù)石蠟切片，片厚5um。常規(guī)HE染色、NF-κB免疫組化染色、封片。顯微鏡觀察、照相。
　　 3.電鏡標(biāo)本制備：麻醉、灌注同光鏡標(biāo)本制備，但灌注液為含2％多聚甲醛和2.5％戊二醛的混合磷酸緩沖液。取包含SFO的腦塊用PBS沖洗，梯度酒精脫水，叔丁醇置換，真空干燥、噴金，日

3、立S-3500N觀察、照相。透射電鏡樣品制備與掃描電鏡樣品制備相同，取下SFO，放入4％戊二醛固定，1％餓酸后固定，樹脂包埋，切片，T-S7500透射電鏡觀察、照相。
　　 4.統(tǒng)計(jì)學(xué)處理：NF-κB陽性細(xì)胞采用麥克奧迪數(shù)碼醫(yī)學(xué)圖像分析系統(tǒng)(Motic Med6.0)測(cè)定光密度。數(shù)據(jù)用均數(shù)加減標(biāo)準(zhǔn)差((-χ)±s)表示。應(yīng)用SNK-q檢驗(yàn)，進(jìn)行兩兩比較，以P＜0.05為有顯著性差異。
　　 結(jié)果：
　　 1.模型

4、制備:實(shí)驗(yàn)動(dòng)物給予鏈脲佐菌素(STZ)腹腔注射后隨機(jī)血糖值大于16.7mmol/L，并伴有“三多一少”癥狀，糖尿病動(dòng)物模型制備成功。
　　 2. HE染色結(jié)果觀察：
　　 2.1 正常對(duì)照組：SFO室管膜細(xì)胞為單層排列，胞核大小不一，多呈梭形或橢圓形。
　　 2.2 模型組：在用藥2周組，SFO室管膜細(xì)胞呈雙層排列，排列緊密，胞核大小不一，大胞核較少，多呈圓形；小胞核較多，多呈梭形或三角形。室管膜下細(xì)胞較多，胞體

5、較小。在用藥4周組，SFO背內(nèi)側(cè)區(qū)、室管膜及室管膜下細(xì)胞分布密集，胞核較大而且染色深：中央?yún)^(qū)細(xì)胞分布較稀疏，胞核淡染，血管擴(kuò)張明顯。在用藥8周組，SFO兩側(cè)大血管處室管膜細(xì)胞呈雙層或多層排列，中央部室管膜細(xì)胞單層排列，排列緊密，室管膜下細(xì)胞稀疏。
　　 3. NF-κB免疫組織化學(xué)染色結(jié)果觀察
　　 3.1 正常對(duì)照組：SFO內(nèi)NF-κB免疫陽性細(xì)胞稀少，胞核呈淺棕黃色，弱陽性。散在分布于兩側(cè)大血管的周圍，平均光密度為1

6、56.42±7.25。
　　 3.2 模型組：在用藥2周組，NF-κB免疫陽性細(xì)胞在SFO內(nèi)均勻分布，核呈棕褐色，強(qiáng)陽性，平均光密度為183.72±8.35。在用藥4周組，NF-κB免疫陽性細(xì)胞在SFO中央部細(xì)胞核輪廓不清，而周邊部細(xì)胞核較清晰，室管膜細(xì)胞呈棕褐色，平均光密度為169.55±5.84。在用藥8周組，免疫陽性細(xì)胞稀少，胞核呈棕黃色，弱陽性，主要分布于兩側(cè)部大血管周圍，平均光密度為158.32±8.72。在用藥2周組

7、、用藥4周組與對(duì)照組光密度測(cè)定結(jié)果比較均有顯著性差異(P＜0.05)、用藥8周組與正常對(duì)照組無顯著性差異(P＞0.05)。
　　 4.掃描電鏡觀察結(jié)果：
　　 4.1 正常對(duì)照組：對(duì)照組：SFO為一尖朝向嘴側(cè)，底朝向尾側(cè)的三角形無纖毛區(qū)域。室管膜表面凹凸不平，與周圍分界清楚。
　　 4.2 模型組：在用藥2周組，室管膜細(xì)胞邊界清晰，有些細(xì)胞飽滿、有些細(xì)胞扁平，細(xì)胞表面可見到圓形小破孔；有的細(xì)胞排列松散，界限清楚，

8、細(xì)胞表面有茂密的微絨毛。在用藥4周組，室管膜細(xì)胞表面凹凸不平，出現(xiàn)皺褶，細(xì)胞膜可見大小不一的多個(gè)小破孔，并可見細(xì)胞膜缺失、細(xì)胞器裸露的細(xì)胞；有些細(xì)胞表面光滑，可見大量密集大小不等的分泌顆粒，多呈乳頭狀。在用藥8周組，有的室管膜細(xì)胞表面褶皺明顯，可見球形分泌顆粒；有的室管膜細(xì)胞呈菜花狀，在微絨毛的表面出現(xiàn)密集帶蒂的分泌顆粒。
　　 5.透射電鏡觀察結(jié)果：
　　 5.1 對(duì)照組：SFO室管膜細(xì)胞腦室面完整，有少量的微絨毛和乳

9、頭狀微突起，室管膜細(xì)胞之間可見緊密連接，室管膜細(xì)胞呈柱狀，排列規(guī)則。
　　 5.2 模型組：室管膜細(xì)胞之間可見縫隙連接，縫隙寬窄不等，呈鋸齒狀，胞核內(nèi)異染色質(zhì)較多，“邊集”現(xiàn)象明顯，室管膜面可見較多分泌顆粒。
　　 結(jié)論：①首次在電鏡下觀察到SFO在糖尿病時(shí)室管膜細(xì)胞的超微結(jié)構(gòu)發(fā)生變化，主要表現(xiàn)為分泌顆粒明顯增多。②糖尿病時(shí)SFO的NF-KB免疫陽性細(xì)胞的分布有明顯區(qū)域差異，免疫陽性細(xì)胞的光密度測(cè)定結(jié)果為：2周組光密度＞