不同年齡階段大鼠連合下器Sox2陽性細(xì)胞的形態(tài)學(xué)觀察.pdf

1、目的:觀察出生后不同年齡階段大鼠連合下器Sox2陽性細(xì)胞的分布和形態(tài)結(jié)構(gòu)的變化。探討在連合下器中神經(jīng)干細(xì)胞的增殖與分化，從而研究在連合下器中神經(jīng)干細(xì)胞的功能和意義。
　　方法:雄性健康SD大鼠，選取4周齡、8周齡、16周齡、24周齡各6只，共24只。麻醉后，經(jīng)心臟灌注4％多聚甲醛磷酸緩沖液(0.1 mol/L，pH7.2)。常規(guī)脫水、浸蠟、包埋，切片后，用免疫組化法檢測(cè)連合下器處Sox2的表達(dá)。
　　1、標(biāo)本制備:將不同年齡

2、階段組別SD大鼠以水合氯醛(0.3ml/100g)麻醉，自升主動(dòng)脈灌注4％多聚甲醛磷酸鹽緩沖液(0.1 mol/L，pH7.2)行前固定，立即取腦，后固定，經(jīng)脫水，透明，包埋，選取含連合下器部分，石蠟切片機(jī)冠狀面切片，厚度約為5μm，制成石蠟切片。本次實(shí)驗(yàn)對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的處置符合動(dòng)物倫理學(xué)要求。
　　2、免疫組織化學(xué)染色:將上述標(biāo)本取材中得到的石蠟切片經(jīng)Sox2免疫組織化學(xué)染色，蘇木精復(fù)染后，中性樹膠封片，待干燥后使用OlympusB

3、X-UCB光學(xué)顯微鏡觀察并照相。
　　3、統(tǒng)計(jì)學(xué)處理:實(shí)驗(yàn)結(jié)果中所示陽性細(xì)胞采用專業(yè)圖像分析軟件Image-Pro Plus6.0測(cè)定陽性細(xì)胞數(shù)，計(jì)算陽性率。經(jīng)SPSS16.0統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，以P＜0.05為具有顯著性差異。
　　結(jié)果:Sox2免疫組織化學(xué)染色后，切片在光學(xué)顯微鏡下觀察可以看到Sox2陽性細(xì)胞為胞核著色，連合下器與周圍邊界清晰，腹側(cè)為室管膜面，室管膜面上可見清晰的界線。室管膜面清晰界線的背側(cè)為無結(jié)構(gòu)均質(zhì)狀結(jié)構(gòu)，無

4、陽性表達(dá)，均質(zhì)狀結(jié)構(gòu)的背側(cè)可以看到細(xì)胞層，細(xì)胞呈圓形或橢圓形，不同年齡階段連合下器區(qū)域陽性細(xì)胞形態(tài)、分布各異，排列致密。在連合下器背側(cè)邊緣處可見豐富血管分布，兩側(cè)部多于中央部，血管內(nèi)皮細(xì)胞清晰明顯。在顯微鏡下通過測(cè)量得到:室管膜細(xì)胞大小約為3.5～6.5μm×7.5～10.5μm。
　　將顯微鏡下觀察得到的圖像保存，選取相同位置的橫斷面，同一倍數(shù)，相同面積，采用專業(yè)圖像分析軟件Image-Pro Plus6.0測(cè)定陽性細(xì)胞數(shù)，計(jì)算