2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡(jiǎn)介

1、目的:
  水飛薊賓是從水飛薊中提取的一種活性成分,最初作為肝臟保護(hù)藥物廣泛應(yīng)用于急慢性肝炎、肝硬化。近年來的研究發(fā)現(xiàn)水飛薊賓還具有廣泛的抗腫瘤作用。在體外及體內(nèi)多項(xiàng)實(shí)驗(yàn)中證實(shí),水飛薊賓可抑制包括前列腺癌、結(jié)腸癌、膀胱癌、乳腺癌等在內(nèi)的多種惡性腫瘤。目前研究結(jié)果顯示水飛薊賓可通過調(diào)節(jié)細(xì)胞周期使腫瘤細(xì)胞生長阻滯、抑制腫瘤的增殖,還可通過下調(diào)VEGF及MMPs降低腫瘤侵襲和遷移能力,還可通過調(diào)節(jié)多種轉(zhuǎn)錄因子誘導(dǎo)凋亡的發(fā)生,同時(shí)還能與其

2、他抗腫瘤藥物產(chǎn)生協(xié)同作用,并可逆轉(zhuǎn)腫瘤細(xì)胞的多重耐藥、增加化療藥物對(duì)腫瘤細(xì)胞的敏感性。
  FoxM1屬于FOX轉(zhuǎn)錄因子家族的成員,廣泛存在于腫瘤細(xì)胞中,在增殖活躍細(xì)胞中高度表達(dá),具有調(diào)控細(xì)胞周期的作用,可促使細(xì)胞過度增殖。近年的研究還發(fā)現(xiàn)FoxM1不僅參與了細(xì)胞周期調(diào)控,還通過調(diào)節(jié)其他靶基因的表達(dá),從而參與細(xì)胞凋亡的調(diào)控。同時(shí)還發(fā)現(xiàn)多種抗腫瘤藥物都是以FoxM1為作用靶點(diǎn),從而實(shí)現(xiàn)抑制增殖、誘導(dǎo)凋亡的抗腫瘤作用。
  本實(shí)

3、驗(yàn)研究首次證實(shí)了FoxM1為水飛薊賓的作用靶點(diǎn),水飛薊賓通過作用于FoxM1從而抑制膠質(zhì)瘤的增殖、誘導(dǎo)凋亡。同時(shí)驗(yàn)證了PI3K信號(hào)作為FoxM1的上游信號(hào)參與了FoxM1的調(diào)控,共同參與了水飛薊賓誘導(dǎo)膠質(zhì)瘤凋亡的過程,F(xiàn)oxM1可能參與了PI3K/Akt信號(hào)通路轉(zhuǎn)導(dǎo)的過程。
  方法:
  1、選擇人膠質(zhì)瘤細(xì)胞系U87進(jìn)行體外培養(yǎng),給予不同濃度的水飛薊賓作用后,通過Western Blot法檢測(cè)FoxM1的蛋白表達(dá)水平。通過

4、RNA干擾技術(shù)在U87膠質(zhì)瘤細(xì)胞中轉(zhuǎn)入shRNA-FoxM1質(zhì)粒,采用有限稀釋法篩選出穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞。采用流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)轉(zhuǎn)染shRNA-FoxM1后對(duì)U87細(xì)胞凋亡水平的影響,CCK-8法及胎盤蘭染色法檢測(cè)轉(zhuǎn)染shRNA-FoxM1對(duì)細(xì)胞增殖能力的影響,Western blot驗(yàn)證沉默效率及轉(zhuǎn)染shRNA-FoxM1后對(duì)凋亡相關(guān)蛋白表達(dá)水平的影響。
  2、分別給予PI3K、Akt的抑制劑,采用Western blot法檢測(cè)Fox

5、M1和Akt磷酸化蛋白的表達(dá)水平,明確PI3K/Akt信號(hào)通路對(duì)FoxM1的影響。在沉默F(xiàn)oxM1蛋白表達(dá)的基礎(chǔ)上聯(lián)合應(yīng)用水飛薊賓和PI3K抑制劑,采用Western Blot檢測(cè)凋亡相關(guān)蛋白及FoxM1的表達(dá)水平,采用CCK-8法及胎盤藍(lán)染色法檢測(cè)細(xì)胞存活率,明確PI3K/Akt信號(hào)通路和FoxM1在水飛薊賓在抑制膠質(zhì)瘤增殖及誘導(dǎo)凋亡中的作用。
  結(jié)果:
  1、水飛薊賓通過劑量、時(shí)間依賴方式抑制U87細(xì)胞的增殖

6、  將不同濃度的水飛薊賓分別作用于U87細(xì)胞24小時(shí)、48小時(shí)和72小時(shí),采用CCK-8法檢測(cè)細(xì)胞活力。結(jié)果顯示,隨著水飛薊賓的濃度增加和作用時(shí)問延長,其對(duì)U87細(xì)胞抑制程度隨之增加。
  2、水飛薊賓誘導(dǎo)U87膠質(zhì)瘤細(xì)胞凋亡,其凋亡水平與藥物濃度成正比
  與對(duì)照組相比,水飛薊賓可誘導(dǎo)U87膠質(zhì)瘤細(xì)胞凋亡,隨著水飛薊賓的藥物濃度的增加,U87細(xì)胞的凋亡水平也隨之增加。
  3、水飛薊賓可下調(diào)FoxM1的蛋白表達(dá)水平,

7、其下調(diào)程度與藥物濃度相關(guān)
  與對(duì)照組相比,隨著水飛薊賓藥物濃度的增加,U87細(xì)胞中的FoxM1蛋白表達(dá)水平也隨之下調(diào)。100μM水飛薊賓作用48小時(shí)即可顯著下調(diào)U87細(xì)胞中FoxM1的蛋白表達(dá)水平。
  4、沉默F(xiàn)oxM1可抑制膠質(zhì)瘤增殖并誘導(dǎo)凋亡發(fā)生,在沉默F(xiàn)oxM1的基礎(chǔ)上聯(lián)合應(yīng)用水飛薊賓可顯著的抑制膠質(zhì)瘤細(xì)胞增殖、誘導(dǎo)凋亡。
  與對(duì)照組相比,沉默F(xiàn)oxM1可抑制U87膠質(zhì)瘤細(xì)胞增殖能力并誘導(dǎo)凋亡的發(fā)生。沉默F(xiàn)

8、oxM1的基礎(chǔ)上,應(yīng)用100μM水飛薊賓作用48小時(shí)后可顯著的抑制腫瘤細(xì)胞增殖并誘導(dǎo)凋亡。
  5、沉默F(xiàn)oxM1蛋白表達(dá)水平后,可上調(diào)Cleaved-Caspase3和Bax蛋白表達(dá)水平,同時(shí)下調(diào)Caspase3和Bcl-2的蛋白表達(dá)水平。
  通過Western Blot法檢測(cè)發(fā)現(xiàn),與對(duì)照組相比,沉默F(xiàn)oxM1的表達(dá)水平可增加Cleaved-Caspase3和Bax的蛋白表達(dá)水平,同時(shí)降低Caspase3和Bcl-2的蛋

9、白表達(dá)水平。
  6、PI3K抑制劑LY294002和Wortmannin可下調(diào)U87膠質(zhì)瘤細(xì)胞中FoxM1的蛋白表達(dá)水平,而Akt抑制劑MK2206并不能改變FoxM1的蛋白表達(dá)水平。
  分別給予PI3K和Akt的抑制劑,通過Western Blot檢測(cè)發(fā)現(xiàn),給予PI3K抑制劑組均出現(xiàn)FoxM1的蛋白表達(dá)水平下調(diào),而給予Akt抑制劑組的FoxM1蛋白表達(dá)水平無明顯變化。
  7、沉默F(xiàn)oxM1的蛋白表達(dá)水平后,可下

10、調(diào)Akt的磷酸化水平。
  8、在沉默F(xiàn)oxM1的蛋白表達(dá)基礎(chǔ)上聯(lián)合應(yīng)用水飛薊賓和PI3K抑制劑,可顯著抑制膠質(zhì)瘤細(xì)胞的增殖能力
  9、在沉默F(xiàn)oxM1的蛋白表達(dá)基礎(chǔ)上聯(lián)合應(yīng)用水飛薊賓和PI3K抑制劑,可顯著上調(diào)凋亡蛋白Bax、Cleaved-Caspase3的蛋白表達(dá)水平,下調(diào)凋亡抑制蛋白Caspase3、Bcl-2的蛋白表達(dá)水平
  結(jié)論:
  1、水飛薊賓以時(shí)間、劑量依賴方式抑制膠質(zhì)瘤細(xì)胞增殖,并誘導(dǎo)凋亡

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