KiSS-1基因?qū)θ焉镒甜B(yǎng)細(xì)胞生物學(xué)行為影響及其在復(fù)發(fā)性流產(chǎn)中作用機(jī)制的研究.pdf

1、目的:探討KiSS-1基因?qū)θ焉镒甜B(yǎng)細(xì)胞生物學(xué)行為的影響及其在復(fù)發(fā)性流產(chǎn)中的作用機(jī)制。
　　方法:①免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)kisspeptin、GPR54在復(fù)發(fā)性流產(chǎn)患者絨毛及蛻膜組織中表達(dá)水平;②構(gòu)建重組質(zhì)粒pcDNA3.1(+)-KiSS-1;③將重組質(zhì)粒pcDNA3.1(+)-KiSS-1轉(zhuǎn)染至人滋養(yǎng)層腫瘤JAR細(xì)胞株,建立單克隆細(xì)胞系;④應(yīng)用RT-PCR及Western Blot方法分別檢測(cè)轉(zhuǎn)染細(xì)胞KiSS-1的mRNA及編

2、碼多肽kisspeptin表達(dá);⑤檢測(cè)KiSS-1基因及外源性kisspeptin對(duì)JAR細(xì)胞生長(zhǎng)增殖、軟瓊脂克隆形成能力及遷移侵襲能力的影響。
　　結(jié)果:①?gòu)?fù)發(fā)性流產(chǎn)患者絨毛 kisspeptin、GPR54的表達(dá)均明顯低于正常妊娠者(P<0.05),蛻膜組織kisspeptin的表達(dá)明顯低于正常妊娠者(P<0.05),蛻膜組織中GPR54的表達(dá)在兩組間無(wú)明顯差異;②成功構(gòu)建重組質(zhì)粒pcDNA3.1(+)-KiSS-1,并經(jīng)PC

3、R和測(cè)序鑒定無(wú)誤;③將重組質(zhì)粒pcDNA3.1(+)-KiSS-1成功轉(zhuǎn)染至人滋養(yǎng)細(xì)胞腫瘤株JAR細(xì)胞;④篩選出穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的細(xì)胞,并通過(guò) RT-PCR和 Western Blot鑒定目的基因KiSS-1 mRNA和編碼多肽kisspeptin均成陽(yáng)性表達(dá);⑤KiSS-1基因和kisspeptin對(duì)JAR細(xì)胞的生長(zhǎng)增殖及克隆形成能力無(wú)影響,但明顯抑制其遷移和侵襲能力。
　　結(jié)論: Kisspeptin在復(fù)發(fā)性流產(chǎn)患者母胎界面絨毛和蛻膜