后部板層角膜供體材料的應(yīng)用實驗研究.pdf

1、目的：建立大鼠同種異體無縫線前、后板板層角膜移植(LKP)動物模型。觀察角膜上皮細(xì)胞的生長及組織學(xué)特點。
　　 方法：選取Wistar大鼠27只5411艮為供體制備前板(前彈力層+部分基質(zhì)層)和后板(后彈力層+部分基質(zhì)層)角膜植片；雌性SD大鼠108只為受體分為2組，每組54只，實驗組行后板LKP，對照組行前板LKP，兩組大鼠均右眼施行LKP手術(shù)，左眼為正常對照。用豬源纖維蛋白粘合劑(Porcine Fibrin Sealant

2、 Kit)替代角膜縫線行LKP，術(shù)畢行瞼緣縫合術(shù)。兩組術(shù)后第1天拆除眼瞼縫合線，前3天滴用0.5％左氧氟沙星滴眼液(參天制藥可樂必妥)和妥布霉素地塞米松滴眼液(Alcon公司典必殊)4次/日，以后滴眼藥水2次/日，1月后停藥。兩組術(shù)后3、7、14、28、42及56天裂隙燈下觀察術(shù)眼并行排斥反應(yīng)指數(shù)(RI)評分，熒光素鈉染色觀察角膜缺損并用photoshop軟件計算角膜上皮生長面積。各觀察時間點處死實驗組和對照組大鼠各9只，取術(shù)眼角膜制備

3、HE染色標(biāo)本、透射電鏡標(biāo)本觀察角膜上皮各層細(xì)胞形態(tài)、層數(shù)同時行角膜K12免疫熒光檢測角蛋白表達(dá)水平。
　　 結(jié)果：選入的108只SD大鼠在實驗過程中因麻醉過度死亡占14只，術(shù)后植片出現(xiàn)感染占7只，均被清除后得到及時補(bǔ)充，108只SD大鼠全部進(jìn)入最終結(jié)果分析。裂隙燈下觀察：實驗組和對照組角膜植片混濁水腫過程相同，RI圖表曲線幾乎重疊，其峰值及整體曲線走向大體一致，整體RI指數(shù)呈下降趨勢。熒光素鈉染色：兩組著色范圍縮小時間相同。ph

4、otoshop畫圖軟件輔助分析角膜上皮生長面積觀察到兩組術(shù)后各時間點角膜上皮爬行面積差異甚小。對RI和Fls評分?jǐn)?shù)據(jù)及上皮生長面積，采取兩樣本t檢驗，以a=0.05，p<0.05為數(shù)據(jù)有統(tǒng)計學(xué)意義，計算得出各時間點p>0.05，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義。HE染色切片光鏡觀察：兩組術(shù)后均從早期上皮生長不典型到后期上皮結(jié)構(gòu)均長出，形態(tài)接近正常上皮細(xì)胞。透射電鏡觀察：早期兩組角膜表皮細(xì)胞微絨毛均稀疏，至后期五層上皮細(xì)胞結(jié)構(gòu)均長出，微絨毛生長致密。同

5、時觀察到角膜上皮基底膜與后彈力層連接有間隙，而與前彈力層連接緊密。K12免疫熒光檢測：兩組術(shù)后免疫熒光檢測可見上皮細(xì)胞從早期的弱熒光到后期的強(qiáng)熒光。
　　 結(jié)論：
　　 1、首次建立大鼠同種異體無縫線前、后板LKP動物模型。
　　 2、通過各項指標(biāo)檢測，觀察到兩組在不同時間點上皮爬行的速率、面積及生長形態(tài)大致相同，證實后板同樣能作為角膜上皮細(xì)胞生長的載體，為后板進(jìn)一步應(yīng)用提供了實驗和理論依據(jù)。
　　 3、