TRAIL誘導(dǎo)乙型肝炎細(xì)胞凋亡及差異蛋白質(zhì)組學(xué)研究.pdf

1、研究背景: 乙型肝炎病毒(HBV)感染是我國最為常見的疾病之一，我國約有1.2億人攜帶乙肝病毒，其中慢性乙肝病人3000萬，約10％-30％病人可發(fā)展為肝硬化，部分病人病情繼續(xù)惡化為肝癌。 許多實(shí)驗(yàn)表明HBV感染確能影響肝細(xì)胞凋亡機(jī)制的平衡狀態(tài)，對(duì)于HBV感染與細(xì)胞凋亡的關(guān)系研究，以往比較集中在Fas/FasL系統(tǒng)。腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體(TRAIL)能選擇性地殺傷多種腫瘤細(xì)胞，卻不會(huì)引起正常細(xì)胞凋亡，而且在病毒與

2、宿主細(xì)胞相互作用中也起重要作用。有關(guān)HBV感染與TRAIL系統(tǒng)的研究多集中于細(xì)胞表面TRAIL及其受體表達(dá)情況分析，關(guān)于TRAIL引發(fā)細(xì)胞凋亡過程等的研究不多。 目的: 本研究利用比較蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)，以HBV穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的肝癌細(xì)胞株HepG2.2.15為實(shí)驗(yàn)對(duì)象，研究在細(xì)胞凋亡誘導(dǎo)配體TRAIL作用下，該細(xì)胞株蛋白質(zhì)組學(xué)意義上的改變。 方法: 應(yīng)用MTT法，了解TRAIL對(duì)HepG2.2.15細(xì)胞的誘導(dǎo)效果；

3、應(yīng)用瓊脂糖凝膠電泳、流式細(xì)胞術(shù)和Caspase-3酶活性分析TRAIL誘導(dǎo)HepG2.2.15細(xì)胞凋亡過程；運(yùn)用比較蛋白質(zhì)組學(xué)的研究方法，對(duì)HepG2.2.15細(xì)胞凋亡發(fā)生后質(zhì)、量有明顯變化的蛋白質(zhì)點(diǎn)進(jìn)行比較和分析。 結(jié)果: 1．TRAIL(0.1gg/ml)作用于HepG2.2.15細(xì)胞株12h、24h、36h后，細(xì)胞死亡率分別為17.91％、41.26％、59.85％。 2．PI單染亞二倍體含量12h后為21

4、.8％，高于對(duì)照組的8.7％。 3．24h后DNA電泳200bp處出現(xiàn)特異性條帶。 4．6h后Caspase-3酶活性為對(duì)照組的4.76倍。 5．制備型雙向電泳，分離經(jīng)TRAIL誘導(dǎo)的細(xì)胞和對(duì)照組細(xì)胞，對(duì)蛋白質(zhì)點(diǎn)用圖像分析軟件進(jìn)行初步分析，兩組細(xì)胞的蛋白圖譜具有較好的相關(guān)性和可比性，選擇兩塊凝膠進(jìn)行配對(duì)比較，分析表明：凋亡組中出現(xiàn)6個(gè)新斑點(diǎn)，34個(gè)斑點(diǎn)表達(dá)量顯著升高，30個(gè)斑點(diǎn)表達(dá)量顯著降低。 結(jié)論:通過