心肌梗死患者SIRT1基因啟動子基因分析及功能測定.pdf

1、背景：冠心病(CAD)是一種主要由冠狀動脈血管壁粥樣硬化所引起，由遺傳和環(huán)境因素及兩者之間相互作用引起的多基因疾病，而心肌梗死是冠心病的一種限制性表型，包括ST抬高型心肌梗死、非ST抬高型心肌梗死。目前，國內(nèi)外通過對候選基因、連鎖分析、全基因組關(guān)聯(lián)研究(GWAS)等確定與心肌梗死相關(guān)聯(lián)的基因及基因位點有十多個，但是其在心肌梗死中遺傳因素及致病的分子機制仍不清楚。SIRT1是一種依賴NAD+的組蛋白去乙酰化酶，參與了體內(nèi)許多生理功能的調(diào)節(jié)

2、，包括眾多基因轉(zhuǎn)錄、能量代謝、炎癥反應、氧化應激以及細胞衰老過程的調(diào)節(jié)等，尤其在糖代謝、脂代謝、調(diào)節(jié)胰島素分泌中發(fā)揮著重要的作用。SIRT1還可以通過去乙?；允上嚓P(guān)蛋白(ATG)和叉頭框蛋白轉(zhuǎn)錄因子(FOXOs)誘導自噬，在心肌梗死病人中發(fā)現(xiàn)自噬減少。此外，SIRT1也參與調(diào)節(jié)血管內(nèi)皮和動脈粥樣硬化的形成。因此，我們假設(shè)SIRT1可能參與心肌梗死的發(fā)病。
　　 目的：⑴通過對心肌梗死病人進行SIRT1基因啟動子的遺傳學分析，明

3、確SIRT1基因啟動子基因變異與心肌梗死的關(guān)系。⑵通過熒光素酶報告基因載體系列pGL3測定SIRT1功能，檢測其功能變化，為進一步從基因水平預測心肌梗死的發(fā)病風險，并作為預防和治療靶位點提供理論基礎(chǔ)。
　　 方法：①PCR法擴增SIRT1基因啟動子DNA序列，測序后分析各組SIRT1基因啟動子序列變化情況。②應用pMDR19-T載體擴增SIRT1突變基因，將SIRT1突變基因插入到pGL3-Basic載體，同pRL-TK載體共轉(zhuǎn)

4、染HEK-293細胞，分別測螢火蟲熒光素酶和海腎熒光素酶的量，計算其比值，觀察SIRT1基因功能變化。
　　 結(jié)果：⑴基因分析發(fā)現(xiàn)六個單核苷酸多態(tài)性(SNPs)和14 DNA序列變異被確定。其中，五種異常雜合變異體(g.69643743Ins，g.69643840Ins，g.69643903G＞C，g.69644235G＞C and g.69644353G＞T)在五個MI患者中被發(fā)現(xiàn)，但是在對照組沒有異常。此外，在三個MI患者發(fā)

5、現(xiàn)一個SNP(g.69643707A＞C，rs35706870)，但在對照組中沒有。與此相反，五個異常雜合變異體(g.69643672G＞A，g.69644226C＞T，g.69644278A＞G，g.69644408G＞A and g.69644408G＞T)只在對照組中被確認。其余的單核苷酸多態(tài)性和序列變異在MI患者和對照組中均被發(fā)現(xiàn)，其頻率相似。⑵心肌梗死患者中SIRT1突變基因功能與正常人比較差異有統(tǒng)計學意義(p＜0.05)，而