Adipophilin通過ERK1-2-PPARγ途徑促進(jìn)細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)蓄積.pdf

1、目的: 通過觀察 Ox-LDL孵育 RAW264.7細(xì)胞不同時(shí)間后 PPARγ和adipophilin表達(dá)和ERK1/2活性及細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)蓄積的變化、觀察ERK1/2抑制劑或PPARγ抑制劑/激動(dòng)劑預(yù)處理細(xì)胞后細(xì)胞內(nèi)上述指標(biāo)的變化、觀察穩(wěn)定高表達(dá)adipophilin和沉默adipophilin基因的RAW264.7細(xì)胞株細(xì)胞內(nèi)上述指標(biāo)的變化，探討adipophilin是否通過ERK1/2-PPARγ信號(hào)途徑促進(jìn)細(xì)胞內(nèi)的脂質(zhì)蓄積，闡明ad

2、ipophilin促進(jìn)泡沫細(xì)胞形成的機(jī)制。
　　方法: 用50μg/ml Ox-LDL孵育細(xì)胞不同時(shí)間后，分別用半定量RT-PCR和Western印跡檢測(cè)adipophilin、PPARγ的mRNA和蛋白表達(dá)的變化，以Western印跡檢測(cè)ERK1/2及其磷酸化；用ERK1/2抑制劑預(yù)孵育細(xì)胞2 h，再與50μg/ml Ox-LDL共孵育24 h后，檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)上述指標(biāo)的變化；用PPARγ抑制劑或激動(dòng)劑預(yù)孵育細(xì)胞2 h，再與50μg

3、/ml Ox-LDL共孵育24 h后，檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)上述指標(biāo)的變化；構(gòu)建穩(wěn)定高表達(dá)adipophilin和沉默adipophilin的RAW264.7細(xì)胞株，檢測(cè)這兩種細(xì)胞與50μg/ml Ox-LDL共孵育24 h后細(xì)胞內(nèi)的脂質(zhì)蓄積情況，分別用半定量RT-PCR和Western印跡檢測(cè)adipophilin、PPARγ的mRNA和蛋白表達(dá)的變化，以Western印跡對(duì)與動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)病有關(guān)的ERK1/2及其磷酸化進(jìn)行檢測(cè)。
　　結(jié)果

4、: 隨著RAW264.7細(xì)胞荷脂時(shí)間的延長(zhǎng)，胞漿內(nèi)脂滴的數(shù)量、adipophilin和PPARγ的mRNA與蛋白表達(dá)明顯增加，磷酸化的ERK1/2也增加；而ERK1/2的抑制劑能減少胞漿內(nèi)的脂滴數(shù)量，adipophilin、PPARγ的mRNA與蛋白表達(dá)也下調(diào)，磷酸化的ERK1/2減少；給予PPARγ的激動(dòng)劑處理后，胞漿內(nèi)脂滴數(shù)量、adipophilin、PPARγ的mRNA與蛋白表達(dá)增加，ERK1/2被活化，而用PPARγ的抑制劑處理

5、后，上述指標(biāo)則呈現(xiàn)相反的變化；在荷脂情況下，穩(wěn)定高表達(dá)adipophilin的細(xì)胞中脂質(zhì)蓄積明顯增加，PPARγ和磷酸化的ERK1/2下調(diào)，沉默adipophilin的細(xì)胞中脂質(zhì)蓄積則減少，而PPARγ和磷酸化ERK1/2反而上調(diào)。
　　結(jié)論: Ox-LDL能活化ERK1/2，抑制ERK1/2的活性能抑制Ox-LDL誘導(dǎo)的adipophilin和PPARγ的表達(dá)，并進(jìn)一步抑制脂質(zhì)蓄積；PPARγ激動(dòng)劑能增加adipophilin