睪酮通過ERK1-2信號途徑刺激人臍帶靜脈內(nèi)皮細胞生成TFPI.pdf

1、背景與目的：
　　男性性別是一個獨立的心血管疾病發(fā)病(cardiovascular disease,CAD)的危險因子,睪酮(Testosterone,T)是人體內(nèi)最主要的雄激素,它在動脈粥樣硬化(artherosclerosis, AS)中的作用及機理尚無明確報道,我們的前期實驗證實生理濃度睪酮可促進人臍帶靜脈內(nèi)皮細胞合成、分泌組織因子途徑抑制物(tissue factor pathway inhibitor,TFPI),增強內(nèi)

2、皮細胞抗凝活性,具有抗動脈粥樣硬化作用。本研究在前期實驗的基礎(chǔ)上,擬觀察睪酮對細胞外信號調(diào)節(jié)激酶ERK1/2磷酸化水平的影響,研究ERK1/2的激活與TFPI表達的關(guān)系,探討睪酮調(diào)節(jié)血管內(nèi)皮細胞合成分泌TFPI的具體機制。
　　方法：
　　1.將體外培養(yǎng)的HUVEC分為單純培養(yǎng)基對照組,4個時間段睪酮組(睪酮作用后5、15、30、60 min)和雄激素受體拮抗劑氟他胺(Flutamide組)預處理組(F+T組),Wester

3、n-blotting法檢測睪酮作用于HUVEC后ERK1/2的活化程度。
　　2.將體外培養(yǎng)的HUVEC細胞分為單純培養(yǎng)基對照組(Control組)、睪酮處理組(T組)、ERK1/2抑制劑PD98059處理組(PD組)、PD98059預處理組(PD+T組),ELISA法測各組TFPI蛋白水平, Real-Time RT-PCR檢測各組TFPI轉(zhuǎn)錄水平的表達變化。
　　結(jié)果：
　　1.生理濃度睪酮可激活HUVECs內(nèi)的E

4、RK1/2信號通路,并于30min后達到高峰,而雄激素受體拮抗劑氟他胺可部分抑制睪酮對ERK1/2的激活作用。
　　2.生理濃度睪酮組作用后,TFPI蛋白和mRNA相比明顯增加,經(jīng)ERK1/2抑制劑PD98059預處理后,TFPI的表達受到明顯抑制。
　　結(jié)論：
　　1.生理濃度睪酮可通過與雄激素受體結(jié)合從而促進ERK1/2磷酸化,且在作用30分鐘后達到最大效應。
　　2.生理濃度睪酮可通過ERK1/2途徑來促進