激發(fā)型共刺激分子CD40信號通路對人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞的影響及其機(jī)制.pdf

1、內(nèi)皮細(xì)胞向平滑肌樣細(xì)胞的轉(zhuǎn)分化近年來受到越來越多的重視。這種轉(zhuǎn)分化可能在肺纖維化、動脈粥樣硬化及腎臟纖維化等疾病中起重要作用。內(nèi)皮細(xì)胞上有CD40分子的高表達(dá)，激發(fā)型CD40信號可以導(dǎo)致內(nèi)皮細(xì)胞功能失調(diào)。CD40信號通路對內(nèi)皮細(xì)胞轉(zhuǎn)分化的影響未見相關(guān)報(bào)道。轉(zhuǎn)化生長因子β(-TGF-β)是目前認(rèn)為作用最強(qiáng)的促纖維化生長因子，其在腎小管上皮細(xì)胞轉(zhuǎn)分化中被認(rèn)為是最重要的，但在內(nèi)皮細(xì)胞轉(zhuǎn)分化中的作用還不清楚。 目的：應(yīng)用抗CD40激發(fā)型

2、單克隆抗體5C11作用于體外培養(yǎng)的臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞，通過流式細(xì)胞儀、免疫細(xì)胞化學(xué)等方法觀察內(nèi)皮細(xì)胞能否向平滑肌樣細(xì)胞轉(zhuǎn)化，同時探討轉(zhuǎn)化生長因子-β(TGF-β)在轉(zhuǎn)化中的作用。 方法： 1)MTT比色法：把處于對數(shù)生長期生長狀態(tài)良好(細(xì)胞呈鋪路石樣)的HUVEC接種到96孔板，加入不同濃度的5C11，同時設(shè)陰性對照組。檢測5C11對HUVEC促增殖或抑制的影響。2)細(xì)胞爬片免疫化學(xué)法：把生長良好的細(xì)胞接種于6孔培養(yǎng)板，每孔放一滅菌

3、蓋玻片，培養(yǎng)后，分組加入5C11，濃度為5 ug/ml，同時設(shè)陰性對照組，繼續(xù)培養(yǎng)。分別于24h、48h、72h取出玻片，觀察內(nèi)皮細(xì)胞的轉(zhuǎn)化情況。3)流式細(xì)胞儀檢測經(jīng)5C11刺激后的內(nèi)皮細(xì)胞中TGF-β的Ⅱ型受體的表達(dá)情況。4)流式細(xì)胞儀檢測經(jīng)5C11刺激后的內(nèi)皮細(xì)胞是否發(fā)生凋亡。 結(jié)果：1)MTT法檢測結(jié)果：應(yīng)用MTT法檢測5C11對HUVEC抑制或增殖的影響，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)應(yīng)用統(tǒng)計(jì)分析軟件分析無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。流式細(xì)胞

4、儀檢測細(xì)胞凋亡：內(nèi)皮細(xì)胞經(jīng)過5C11刺激72H后應(yīng)用流式細(xì)胞儀未檢測到細(xì)胞凋亡的發(fā)生。2)抗CD40單克隆抗體5C11不同濃度刺激對HUVEC的影響：細(xì)胞免疫組織化學(xué)顯示，經(jīng)過5C11刺激后HUVEC正常血管內(nèi)皮細(xì)胞的標(biāo)志分子Flk1隨著刺激時間的延長表達(dá)下調(diào)，肌成纖維細(xì)胞的標(biāo)志分子a-SMA隨著刺激時間的延長表達(dá)上調(diào)(P<0.05)。3)流式細(xì)胞儀檢測經(jīng)5C11刺激后HUVEC上轉(zhuǎn)化生長因子-β(TGF-p)II型受體的表達(dá)是隨著刺激