結(jié)核分枝桿菌蛋白抗原b夾心ELISA方法的建立及其在結(jié)核性腦膜炎診斷中的應(yīng)用.pdf

1、結(jié)核性腦膜炎（tuberculous meningitis. TBM）是一種最常見(jiàn)的神經(jīng)系統(tǒng)結(jié)核病。在肺外結(jié)核中大約有5％～15%的患者累及神經(jīng)系統(tǒng)，約占神經(jīng)系統(tǒng)結(jié)核病的70%左右。近年來(lái)，由于人口流動(dòng)頻繁，免疫抑制劑的廣泛、大量應(yīng)用，耐藥菌種的出現(xiàn)及艾滋?。ˋcquired Immune Deficiency Syndrome.AIDS）患者的增多，不論是在國(guó)內(nèi)，還是在國(guó)外，結(jié)核病的發(fā)病率及病死率的趨勢(shì)，都是在不斷地逐漸增高。結(jié)核病已

2、經(jīng)成為了我們目前需要迫切解決的重大問(wèn)題，因其對(duì)我們?nèi)祟?lèi)的健康造成重大威脅，故成為全球關(guān)注的衛(wèi)生問(wèn)題，并成為部分相對(duì)比較落后的發(fā)展中國(guó)家和經(jīng)濟(jì)條件差的部分地區(qū)，特別是在一些艾滋病高發(fā)地區(qū)（比如非洲部分國(guó)家和地區(qū)）的人群中成為首要死因。因此越來(lái)越受到人們重視。抗原和腦脊液以其特有的優(yōu)勢(shì)，作為檢測(cè)對(duì)象成為我們研究的重點(diǎn)。酶聯(lián)免疫吸附（enzyme linked immunosorbent assay.ELISA）法，以其快速簡(jiǎn)潔、價(jià)格低廉、

3、操作方便等優(yōu)勢(shì)成為我們選擇的根本原因。而單克隆抗體(monoclonal antibody.mAb)和多克隆抗體(polyclonal antibody.pAb)的制備，為我們檢測(cè)抗原奠定基礎(chǔ)。
　　目的:
　　通過(guò)蛋白抗原 b（38kDa抗原）單克隆抗體和多克隆抗體的制備，對(duì)單克隆抗體的篩選，用雙抗體夾心ELISA法，摸索包被時(shí)間、抗體濃度、優(yōu)化條件等，從而，建立定量檢測(cè)腦脊液中結(jié)核分枝桿菌蛋白抗原b（38kDa抗原）的夾

4、心ELISA法，以期建立一種能夠區(qū)分結(jié)核性腦膜炎活動(dòng)性感染與潛伏性感染的方法。
　　方法:
　　制備蛋白抗原 b（38kDa抗原）的鼠源性單克隆抗體(mAb)及兔多克隆抗體（pAb）；以單克隆抗體為包被抗體，多克隆抗體為檢測(cè)抗體，建立檢測(cè)結(jié)核分枝桿菌蛋白抗原b（38kDa抗原）的雙抗體夾心ELISA；應(yīng)用此方法檢測(cè)正常人（n=6）、非結(jié)核性腦膜炎患者（n=26）及臨床確診結(jié)核性腦膜炎患者（n=42）的腦脊液標(biāo)本中蛋白抗原 b

5、（38kDa抗原）的含量，并分析其與結(jié)核性腦膜炎活動(dòng)性感染的相關(guān)性。
　　結(jié)果:
　　成功建立了檢測(cè)蛋白抗原b（38kDa抗原）的夾心ELISA方法，敏感度可達(dá)0.4μg/L。應(yīng)用該方法在正常人及非結(jié)核性腦膜炎患者腦脊液中未檢測(cè)到蛋白抗原 b（38kDa抗原）；在結(jié)核性腦膜炎患者腦脊液中蛋白抗原b（38kDa抗原）含量顯著升高。
　　結(jié)論:
　　通過(guò)夾心ELISA方法檢測(cè)結(jié)核分枝桿菌特異性抗原，為結(jié)核性腦膜炎的早