上皮性卵巢癌分子分型研究和預(yù)后評價模型建立與應(yīng)用的探索.pdf

1、上皮性卵巢癌的死亡率在婦科腫瘤中居第一位，其復(fù)發(fā)率高、早期診斷率低。和其他惡性腫瘤一樣，卵巢癌是多因素起因、多步驟發(fā)展，在微環(huán)境的共同作用下，形成的復(fù)雜組織，在分子水平上存在高度異質(zhì)性。所以臨床中組織形態(tài)和治療方法相同的患者，其分子遺傳學(xué)會不盡一致、臨床預(yù)后也會不同。隨著分子研究的日益進步，本課題首先通過對腫瘤增殖、抗凋亡、誘導(dǎo)血管形成、浸潤、轉(zhuǎn)移、免疫相關(guān)分子進行研究，并與臨床病理特征、治療效果和預(yù)后相結(jié)合，探討其在臨床中的應(yīng)用價值。

2、腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞(TAM)作為機體對腫瘤免疫的第一道防線，可以分為M1和M2型，它們對不同類型的卵巢癌及預(yù)后會產(chǎn)生不同的影響，關(guān)于這方面作用及作用機制的研究目前還是空白。TP53蛋白是維持基因組穩(wěn)定的一個關(guān)鍵分子。當(dāng)染色體分離異?；駾NA序列發(fā)生化學(xué)損傷時，TP53能夠阻止細(xì)胞進入分裂周期，并誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。在96％的高級別漿液性卵巢癌患者中存在TP53基因的缺失或突變。所以本課題對TP53與卵巢癌的預(yù)后、耐藥性也進行了相關(guān)研究。隨后本研

3、究對臨床病理特征和以上的分子進行預(yù)后的多因素回歸分析，建立了三個卵巢癌預(yù)后模型，并通過獨立驗證組對三個模型進行臨床靈敏度和實用性檢測。旨先對患者進行預(yù)后評估，再予以個體化的治療以提高卵巢癌的治療療效。
　　第一部分腫瘤及免疫相關(guān)分子對上皮性卵巢癌臨床診斷和預(yù)后的價值分析
　　研究目的:
　　研究腫瘤增殖、抗凋亡、誘導(dǎo)血管形成、浸潤、轉(zhuǎn)移相關(guān)分子對卵巢癌臨床病理特征、治療效果和預(yù)后的影響，探討TAM的極化分型與卵巢癌病理

4、特征和預(yù)后的相關(guān)性及TAM分型影響卵巢癌預(yù)后的可能作用機制。
　　研究方法:
　　1.使用單變量分析法分析卵巢癌臨床病理特征對總生存期的影響;
　　2.免疫組化方法檢測腫瘤相關(guān)分子在卵巢癌組織中的表達情況，并分析其對臨床病理特征、化療、預(yù)后的相關(guān)性;
　　3.分別用免疫熒光和流式細(xì)胞學(xué)方法檢測卵巢癌組織的癌巢和間質(zhì)中TAM及其分型的表達情況，分析其與臨床病理特征及預(yù)后的相關(guān)性;
　　4.免疫組化方法檢測卵巢

5、癌中高表達MUC2與TAM分型的關(guān)系。免疫熒光方法分別檢測卵巢癌組織中MUC2、TAM及COX-2的表達情況和組織中TAM分型與COX-2表達之間的關(guān)系。
　　研究結(jié)果:
　　1.產(chǎn)次、CA125、腹膜轉(zhuǎn)移、FIGO分期、腫瘤分級、腫瘤殘余灶、鉑類耐藥對總生存期有顯著影響(p＜0.05)。卵巢癌分級系統(tǒng)（低級別或高級別）對卵巢癌預(yù)后的評估價值優(yōu)于WHO分級(ROC:0.815 vs.0.787)。
　　2.P53、VE

6、GF、GDF15、Her2、Kras、PTEN、Brca1、Brca2、Notch3、b-raf、EGFR對總生存期有顯著影響(p＜0.05)。鉑類藥物耐藥與否、殘余灶大小、VEGF、Brca1、Her2、Kras是影響相同F(xiàn)IGO分期、相同組織學(xué)類型、并經(jīng)過相同治療后預(yù)后則不同的卵巢癌患者的因素。Her2、Kras、PTEN與鉑類耐藥有關(guān)。
　　3.腫瘤組織及其癌巢、間質(zhì)中TAM的密度隨FIGO分期和病理分級升高而增加;腫瘤組織

7、中的M1/M2比值隨分期的增加而降低。腫瘤組織中、癌巢中M1的密度和M1/M2比值與卵巢癌的預(yù)后有顯著相關(guān)性。
　　4.高表達MUC2的癌巢組織中，M1的密度低，M1/M2比值低，TAMCOX-2、TAMCOX-2/TAM比值升高，M1型COX-2的表達相應(yīng)降低，對應(yīng)組織中的PGE2的表達量明顯升高。
　　結(jié)論:
　　P53、VEGF、GDF15、Her2、Kras、PTEN、Brca1、Brca2、Notch3、b-

8、raf、EGFR與卵巢癌的臨床病理特征和預(yù)后相關(guān)。腫瘤組織中、癌巢中M1的密度和M1/M2的比值、COX-2+TAM和COX-2是卵巢癌預(yù)后的獨立影響因素，MUC2是影響TAM分型的重要因素之一。
　　第二部分TP53基因分析在上皮性卵巢癌分子診斷中的價值研究
　　研究目的:
　　研究TP53基因在卵巢癌臨床診斷、化療耐藥和預(yù)后評估中的價值。研究方法:
　　1.采用免疫組化檢測P53突變情況，分析其與臨床病理特征

9、、化療耐藥與生存期的相關(guān)性;
　　2.采用免疫組化對相關(guān)分子進行檢測，對P53聯(lián)合其他分子共同預(yù)測卵巢癌預(yù)后的價值進行分析;
　　3.通過免疫組化、DNA定量檢測、流式細(xì)胞周期檢測，探討P53突變與腫瘤細(xì)胞核染色體異常的相關(guān)性。并通過P53突變對MDR1拷貝數(shù)（FISH方法檢測）的影響來研究P53突變患者的耐藥機制。
　　研究結(jié)果:
　　1.單變量分析中，P53的突變與分期(p=0.024)、腹膜轉(zhuǎn)移(p=0.0

10、27)、腫瘤分型(p=0.002)有統(tǒng)計學(xué)相關(guān)性。二次化療后，突變組中TP方案耐受者（部分緩解、無緩解）明顯高于野生組(p=0.005)。P53突變型的總生存率明顯低于野生型(p=0.019)。
　　2.P53與CCNE1(p=0.036)、與FOXM1(p=0.045)、與Brca1(p=0.006)或Brca2(p=0.02)、與PTEN(p＜0.01)聯(lián)合對卵巢癌生存預(yù)后的價值分析高于單一P53檢測法。
　　3.P53

11、突變組中，癌細(xì)胞核DNA異常（細(xì)胞核增大、異倍體數(shù)）明顯高于野生組(p=0.0273，p=0.0432)，其中的MDR1的基因拷貝數(shù)也明顯增加(p=0.0132);在卵巢癌復(fù)發(fā)患者中，P53突變組的MDR1表達升高者占89％(p＜0.01)。
　　結(jié)論:
　　聯(lián)合檢測能提高P53對生存期預(yù)測的準(zhǔn)確性。P53突變是化療后復(fù)發(fā)的獨立影響因素。P53突變的癌細(xì)胞，其DNA差異性顯著增強，細(xì)胞核大小更為懸殊，MDR1異常拷貝數(shù)增加和

12、拷貝數(shù)異常的癌細(xì)胞增多。
　　第三部分上皮性卵巢癌分子預(yù)后評價模型的建立和驗證
　　研究目的:
　　建立結(jié)合分子分型的卵巢癌預(yù)后評估模型，并對其臨床應(yīng)用特異性進行驗證。
　　研究方法:
　　通過COX回歸分析，建立基于臨床病理特征、分子分型及臨床病理特征結(jié)合分子分型的卵巢癌預(yù)后評估模型。對三個模型進行驗證組獨立驗證，尋找出最佳的預(yù)后評估模型。
　　研究結(jié)果:
　　三個卵巢癌預(yù)后評估模型中，臨床病