天麻素對(duì)過(guò)表達(dá)APP的APP695、293細(xì)胞中Aβ水平的影響.pdf

1、目的：
　　隨著全球性老齡化社會(huì)的發(fā)展,阿爾茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)已經(jīng)成為一個(gè)嚴(yán)重威脅人類健康的衛(wèi)生和社會(huì)問(wèn)題。AD的致病核心是β-淀粉樣蛋白(β-amyloid,Aβ)在大腦內(nèi)的沉積。β-淀粉樣蛋白(Aβ)在細(xì)胞外沉積形成老年斑(senile plaque,SP)是AD的主要神經(jīng)病理學(xué)特征之一。以此為出發(fā)點(diǎn),我們探討天麻素在過(guò)表達(dá)淀粉樣前提蛋白(amyloid precursor protein

2、,APP)的細(xì)胞系中抑制Aβ分泌的作用及其作用機(jī)制,并由此探討一種治療阿爾茨海默病的新思路。
　　方法：
　　分別培養(yǎng)過(guò)表達(dá)APP的兩株細(xì)胞系293sw和APP695,加入不同濃度的天麻素,用MTT法檢測(cè)細(xì)胞的活力,并用倒置的顯微鏡觀察細(xì)胞的形態(tài),以確定有效的藥物濃度。
　　采用細(xì)胞免疫組化來(lái)觀察天麻素對(duì)兩株細(xì)胞的細(xì)胞膜穩(wěn)定性的影響。
　　收集兩株細(xì)胞的培養(yǎng)基,用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)方法檢測(cè)培養(yǎng)基中Aβ

3、含量。
　　分別提取細(xì)胞中的蛋白,用Western Blot的方法對(duì)胞內(nèi)APP和IDE進(jìn)行檢測(cè),觀察APP和IDE含量的變化情況。
　　收集兩株細(xì)胞的培養(yǎng)基,用TCA-DOC的方法沉淀培養(yǎng)中Aβ,用Western Blot方法檢測(cè)其含量的變化。
　　結(jié)果：
　　通過(guò)上述的實(shí)驗(yàn),我們發(fā)現(xiàn),濃度在25-200 umol/l的天麻素對(duì)細(xì)胞沒(méi)有造成細(xì)胞的死亡,與對(duì)照組相比,細(xì)胞的活力增強(qiáng),各組細(xì)胞在24 h和48 h時(shí)貼

4、壁良好,軸突較長(zhǎng),有樹狀分支,胞體和突起折光率好;與對(duì)照組相比,無(wú)胞體形態(tài)變化,軸突回縮,貼壁不良,細(xì)胞懸浮。
　　ELISA和Western Blot實(shí)驗(yàn)顯示,兩株細(xì)胞中隨著天麻素的濃度增加,培養(yǎng)基和胞內(nèi)的Aβ含量均有明顯的下降趨勢(shì)。但胞內(nèi)的IDE卻無(wú)明顯的增加。
　　結(jié)論：
　　天麻素在兩株過(guò)表達(dá)APP的293sw和APP695的細(xì)胞系中,能夠抑制胞內(nèi)APP的表達(dá),促使胞外Aβ的降解,保護(hù)神經(jīng)細(xì)胞,可能對(duì)阿爾茨海默