低溫培養(yǎng)增加畢赤酵母的外源蛋白產(chǎn)量的機(jī)制研究.pdf

1、畢赤酵母作為外源蛋白的表達(dá)系統(tǒng)，具有遺傳操作簡(jiǎn)單，培養(yǎng)基成分明確且價(jià)格低廉，高效分泌表達(dá)能力，翻譯后的修飾等突出優(yōu)點(diǎn)，越來(lái)越多的被應(yīng)用于外源蛋白的表達(dá)。低溫培養(yǎng)增加外源蛋白產(chǎn)量的報(bào)道很多，但其背后的機(jī)制并不是很清楚。近年來(lái)，錯(cuò)誤折疊蛋白與細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)壓力和細(xì)胞自噬等方面的研究提示，外源蛋白的錯(cuò)誤折疊可能是影響蛋白分泌產(chǎn)量的一個(gè)主要因素。
　　在本研究中，我們利用重組表達(dá)人白細(xì)胞介素-10（rhIL-10）的畢赤酵母菌株作為研究模型。

2、結(jié)果顯示，在20℃的甲醇誘導(dǎo)條件下得到了較高的rhIL-10的蛋白產(chǎn)量，而在30℃的甲醇誘導(dǎo)條件下rhIL-10的蛋白產(chǎn)量低且酵母細(xì)胞死亡率高。進(jìn)一步的研究結(jié)果顯示，在30℃的甲醇誘導(dǎo)條件下，酵母細(xì)胞的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中長(zhǎng)時(shí)間的積累了較高水平的G3-pro-rhIL10（未成熟的rhIL-10，具有糖基化修飾的信號(hào)肽）。并且，伴隨著G3-pro-rhIL10在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中的滯留，酵母細(xì)胞中積累了較高水平的活性氧自由基，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中的Ca2+泄漏到細(xì)胞質(zhì)中