56067.基因工程白蛋白在畢赤酵母中的高效表達_第1頁
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文檔簡介

1、華中農(nóng)業(yè)大學碩士學位論文基因工程白蛋白在畢赤酵母中的高效表達姓名：宋敏申請學位級別：碩士專業(yè)：生物化學與分子生物學指導教師：鄧子新鄭應華2002.5.1AbstractTostudytheexpressionofrecombinanthumanseiumalbumininpichiapastorisandtOobtainhigh。levelexpressionofrHSAwithgoodbiologicalactivityNumerou

2、sfactorsthatinfluenceheterologousproteinproductioninacertainhostsystemmustbeobservedtogainsuccessfulgeneexpressionandevenwithhighyields，inpichiapastoristheyincludes：propeniesofheterologousgene，siteandmethodofintergration

3、oftheexpressioncassette，methanolutilizationphenotypeofthehostgenedosage，stabilityoftheproduct0urresultshowedthatthesecretingofrHSAinpichiapastoriswasashighasO599／LRapidoptimizationofmicrobiologicalmediabyPlachettBurman，a

4、fulleranalysis，togetherwithsomecorrespondingstrategiesand／orsuggestionwasdonein5LNBSBatch／continuousbioreactorcultureOnthebasisoftheexperimentstheotherfactorssuchasoptimalmethanolfeedingstrategy，initialpH，optimalglycerol

5、feedingstrategywerealsomentionedInadditiontheinfluencesoftheinitialpHonproteaseactivitywereinvestigatedUsingtheimprovedmediumtheconcentrationofrHSAinthefermentation1iquidreachedabove3509／LThesupernatantwasheatedat60℃for8

6、hoursandcentrifugalizedtogetridofthesedimentTheheat—treatedsolutionwastreatedwithanultrafiltrationmembranehavingamolecularweilghtexclusivelimitof30000t11enaddingaminosulphatetoafinalconcentrationof80％toprecipitaterHSAThe

7、precipitatedrhsawasseparatedfromthesupematantfluidbycentrifufation，redissolvedwithdidistilledwaterThealbuminsolutionobtainedintheaboveprocessingwasappliedtoacolmnnpackedwithPhenylsepharoseRTM，thenthealbuminelutedfromthec

8、olumnWasappliedtoacolumnpackedwithDEAESephadexRTMThelinearelutionwascarriedoutandrHSAcouldbeeluteddownafterhaIfofthelinearTherHSAsolutionobtainedafterthepurificationprocedurebyion—exchangechromatographywasanalyzedbymeans

9、ofHPLCAsshownintheresultthepurifiedrHSApreparationwasfoundasasinglepeakofrHSAmonomerThepresenttechnologicalprocessiSsimpleandconvenientandrHSAthusobtainedmaybehopefulofpassingthroughthestandardofC∽KeyWords：rHSA，Pichiapas

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