卡維地洛對映體在經(jīng)不同誘導劑誘導的人肝細胞中的代謝特征.pdf

1、手性藥物在所有藥物中占有相當大的比例，據(jù)統(tǒng)計，天然或半合成藥物幾乎都有手性，化學合成藥物至少有40 ％為手性藥物，然而其中90 ％是以外消旋體形式給藥，從立體化學的角度看，實際上給予的并不是單一物質(zhì)，而是兩種或多種立體構象上不同的藥物。這是因為手性是生物系統(tǒng)的基本特征，人體就是一種高度復雜的手性環(huán)境，構成機體的大分子物質(zhì)如酶、載體、受體、血漿蛋白等都具有手性特征。因此手性藥物作用于機體后，對映體與這些大分子物質(zhì)結合，形成不同性質(zhì)的非對映

2、體復合物，呈現(xiàn)作用機制和結合力的差別，從而導致手性藥物的體內(nèi)立體選擇性特征，即對映異構體在生物環(huán)境中表現(xiàn)出藥物效應和藥代動力學性質(zhì)方面的特異性，包括藥物效應的種類和強度，藥物的吸收、分布、代謝、排泄等方面立體選擇性的差異。因此，在臨床治療中，我們要結合考慮手性藥物各對映體的藥物動力學性質(zhì)、效能、毒副反應，以及各種影響對映體選擇性的因素，從而制定出合理的臨床用藥方案, 以達到最佳的療效。 治療個體化是近年來的重點和熱點，闡明藥物

3、代謝的關鍵酶及其代謝途徑，將減少臨床按經(jīng)驗調(diào)整藥物治療方案和劑量的盲目性，真正實現(xiàn)臨床用藥的合理化和個體化。在機體內(nèi)，物質(zhì)代謝主要是在肝臟進行的，肝細胞色素P450氧化酶系(cytochromeP450，CYP450)是肝臟中重要的混合功能氧化酶系，對許多內(nèi)源、外源性化合物在體內(nèi)的生物轉化有重要作用，在藥理學和毒理學研究中有極其重要的意義。P450氧化酶系是由多個同工酶組成的基因超家族，其中參與內(nèi)源性和外源性物質(zhì)（包括藥物、殺蟲劑、環(huán)境

4、污染物等）代謝的CYP450主要有CYP1A、2A6、2B6、2C、2D6、2E1和3A，分別占P450總量的13％、4％、0.2％、20％、1％～20％、7％和30％。 卡維地洛為一新型具有多種藥理活性的抗高血壓藥物，它在臨床上通常也以外消旋體給藥，但據(jù)報道其對映異構體在藥理學活性和藥代動力學方面有較大差別，目前，國內(nèi)尚沒有關于卡維地洛對映異構體的代謝差異這方面的文獻報道，國外早期有人做過CYP2D6和CYP3A4這兩種酶的代

5、謝產(chǎn)物和立體選擇性差異。 因此本文選用肝細胞體外溫孵法，以β萘黃酮(BNF)和異煙肼(INH)分別誘導人肝細胞作為CYP1A1和CYP2E1組成的酶源，并以未經(jīng)誘導的人肝細胞作空白對照，研究卡維地洛R(+)和S (-)兩種對映體體外代謝的酶動力學變化, 探討在不同的酶源亞族中卡維地洛對映體代謝的差異和立體選擇性，從而可深層次地認識一些藥物相互作用的機制，并積極預測一些藥物相互作用的發(fā)生，為臨床合理用藥提供依據(jù)。本研究包括二部分，

6、分述如下。 第一部分 柱前衍生化HPLC法測定肝細胞培養(yǎng)液中卡維地洛對映體。 目的：建立人肝細胞培養(yǎng)液中卡維地洛消旋體的手性拆分方法，以研究卡維地洛體外代謝的立體選擇性。 方法：選用GITC為柱前衍生化試劑，反相高效液相色譜法檢測，色譜柱：Kromasil C18柱(4.6 mm ×150 mm，5 μm)；流動相：乙腈-0.02mol/L磷酸氫二鈉（25:75），磷酸調(diào)PH至4.3；流速：1.0

7、 ml/min；進樣量：10μL；使用熒光檢測器檢測，激發(fā)波長：285 nm，發(fā)射波長：340 nm。 結果：完全拆分了卡維地洛對映體，分離度為3.2，定量限為0.068mg/L，平均日間和日內(nèi)精密度都<10％ 結論：該方法分離效果好，方法學結果滿意，可用于卡維地洛體外代謝的立體選擇性的研究。 第二部分 卡維地洛對映體在不同誘導劑誘導的肝細胞中的代謝特征。 目的：通過肝細胞體外溫孵法，以BNF和

8、INH分別誘導人肝細胞作為由不同亞族CYP1A1和CYP2E1組成的酶源，并以未經(jīng)誘導的人肝細胞作空白對照，研究卡維地洛兩種對映體體外代謝的酶動力學變化，為臨床合理用藥提供依據(jù)。 方法： 1．分別以7-乙氧基試鹵靈(7-ER)和氯唑沙宗為底物，測定CYP1A1和CYP2E1的活性變化，以確定BNF誘導CYP1A1和INF誘導CYP2E1的最佳濃度。 2．建立HPLC法測定卡維地洛含量的方法學。 3．測定在