2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、目的:
   1.用組合細胞因子誘導人外周血單核細胞(human peripheral blood mononuclear cell,PBMC)生成樹突狀細胞(Dendritic cell,DC)。
   2.用新型誘導劑鈣離子載體(CalciumIonophore,CI)A23187聯(lián)合重組人粒細胞-巨噬細胞集落刺激因子(rhGM-CSF)體外誘導人外周血單核細胞生成DC。
   3.觀察DC刺激細胞毒性T淋巴

2、細胞(CTL)對K562細胞(慢性髓性白血病細胞)產生的特異性殺傷作用。
   方法:
   試驗一:
   1.采用密度梯度離心法及黏附法分離出PBMC,加入rhGM-CSF+重組人白介素-4(rhIL-4)誘導,第5天加入重組人腫瘤壞死因子-α(rhTNF-α),繼續(xù)培養(yǎng)2天,刺激DC成熟。
   2.倒置顯微鏡觀察細胞形態(tài)、數(shù)量的變化。
   3.流式細胞儀檢測DC的表面標志。
  

3、 4.通過四甲基偶氮唑鹽比色法(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)檢測DC刺激同種異體外周血T淋巴細胞增殖的能力。
   試驗二:
   1.采用密度梯度離心法及黏附法分離出PBMC,分組培養(yǎng):
   A:傳統(tǒng)方法組,rhGM-CSF+rhIL-4,誘導72h后,加入rhTNF-α,繼續(xù)培養(yǎng)24h;
   B:新型誘導劑組,加入rhGM-CSF+A23187,誘導96h。<

4、br>   2.K562細胞抗原的制備:收集對數(shù)生長期K562細胞,反復凍融(-80℃/37℃),低溫離心,取上清用微孔濾膜過濾,-20℃保存?zhèn)溆谩?br>   3.培養(yǎng)開始時分別予K562細胞凍融抗原致敏,培養(yǎng)96小時后分別收集負載抗原的DC。
   4.倒置顯微鏡觀察細胞形態(tài)、數(shù)量的變化。
   5.流式細胞儀檢測DC的表面標志。
   6.將負載K562細胞抗原的DC刺激T淋巴細胞,通過MTT比色法檢測

5、各組DC刺激同種異體外周血T淋巴細胞增殖的能力。
   7.通過MTT比色法檢測各組DC對K562細胞的抑制作用。
   8.通過MTT比色法檢測各組DC激活的CTL對K562細胞的殺傷作用。
   結果:
   試驗一:
   1.PBMC經rhGM-CSF及rhIL-4誘導培養(yǎng)5天后,多數(shù)細胞呈集落生長,加入rhTNF-α繼續(xù)培養(yǎng)2天后,可見細胞有典型的樹枝狀突起并呈散在分布。
  

6、2.培養(yǎng)第5天時,DC細胞表型CD83、CD1a、CD86、CD40及CD14分別是(14.3±2.2)%,(12.8±2.1)%,(20.1±1.8)%,(19.9±3.8)%及(16.2±3.3)%。加入TNF-α誘導后,即培養(yǎng)第7天,細胞表型CD83、CD1a、CD86、CD40及CD14分別是(29.8±4.4)%,(18.2±4.5)%,(33.6±4.2)%,(28.1±4.3)%及(8.0±2.8)%(與第5天比較,P值均

7、<0.05)。
   3.成熟后的DC具備較強刺激T淋巴細胞增殖的能力,且增殖效應隨效靶比的增加而增強。
   試驗二:
   1.A23187聯(lián)合rhGM-CSF誘導培養(yǎng)的DC具有典型的樹突形態(tài)。
   2.與傳統(tǒng)組比較,新型誘導劑組誘導的DC表面分子表達水平明顯升高,分別為CD83(45.2±1.8)%vs(16.9±1.3)%;CD1a(31.5±3.9)% vs(20.4±3.4)%;CD86(4

8、0.1±7.8)% vs(26.5±2.2)%;CD40(36.4±6.3)% vs(22.3±3.0)%,P值均<0.05;而CD14表達明顯下降,分別為(5.7±0.8)% vs(19.0±1.6)%,P<0.05。
   3.采用MTT比色法檢測各組方法培養(yǎng)的細胞對同種異體T淋巴細胞的刺激作用,發(fā)現(xiàn)兩組 DC在體外均能有效地激發(fā)同種異體外周血 T淋巴細胞的增殖,與傳統(tǒng)方法相比,新型誘導劑組除效靶比為1:40的增值效應與前者

9、相似,P>0.05,其它效靶比均明顯強,P<0.05,且增殖效應隨效靶比的增加而增強。
   4.與傳統(tǒng)組比較,新型誘導劑組負載K562凍融抗原后的DC對K562細胞抑制作用更明顯,效靶比為1:1及10:1時,抑瘤率分別為(25.33±3.76)% vs(15.55±2.39)%、(35.57±5.23)% vs(22.91±3.21)%,P值均<0.05。
   5.與傳統(tǒng)組比較,新型誘導劑組負載K562凍融抗原后的D

10、C激活的CTL對K562細胞有明顯的殺傷作用,效靶比為10:1及40:1時,殺瘤率分別為(43.33±6.20)% vs(29.93±2.75)%、(60.97±5.18)% vs(43.14±4.75)%,P值均<0.05。
   結論:
   1.組合細胞因子rhGM-CSF+rhIL-4+rhTNF-α能誘導出成熟的DC,但培養(yǎng)時間長、容易污染及費用昂貴。
   2.新型誘導劑CI A23187聯(lián)合rhGM

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