IL-27對AA患者外周血中樹突狀細胞及單核細胞的影響.pdf

1、背景：再生障礙性貧血為多種病因通過免疫途徑破壞骨髓造血干祖細胞引起的骨髓衰竭綜合征，常因造血干祖細胞缺陷、造血微環(huán)境異常、免疫異常而導(dǎo)致全血細胞減少，表現(xiàn)貧血、出血和感染而危及患者生命。AA患者中Th1、CTL細胞活化，Treg數(shù)量及功能下降，IFN-γ和TNF-α增高，而這種現(xiàn)象與IL-27產(chǎn)生的生物學(xué)作用相一致。目前研究表明AA患者骨髓上清中IL-27的水平與AA的嚴(yán)重程度密切相關(guān)，疾病越嚴(yán)重，IL-27的水平就越高。而AA患者抗原

2、提呈細胞的數(shù)量及功能發(fā)生改變，這種改變是否由 IL-27引起？這就引導(dǎo)我們探究IL-27對AA患者中免疫細胞，尤其是抗原提呈細胞對T細胞應(yīng)答的影響。因此，本研究的目的是探究 IL-27對 AA患者抗原提呈細胞的影響，主要包括樹突狀細胞和單核細胞的增殖與凋亡、細胞因子分泌水平、細胞因子mRNA水平的影響，闡明IL-27在AA患者抗原提呈病理機制中的作用。
　　目的：檢測IL-27對AA患者外周血中DC與單核細胞的影響。
　　方

3、法：①采用密度梯度離心法分離 AA患者外周血中單個核細胞（PBMNCs），免疫磁珠分選DC與單核細胞并應(yīng)用流式細胞儀檢測其純度；②利用CCK-8方法測定IL-27對AA患者DC與單核細胞增殖的影響；③Annexin V-PI法測定 IL-27對 DC與單核細胞凋亡的影響；④流式細胞術(shù)檢測 IL-27對AA患者DC表面共刺激分子的影響；⑤ELISA法檢測IL-27對AA患者DC與單核細胞分泌的細胞因子IL-12、IL-23、IL-27的影

4、響；⑥Real-time PCR方法測定IL-27對DC與單核細胞分泌的細胞因子IL-12、IL-23、IL-27 mRNA水平上的影響。
　　結(jié)果：⑴IL-27能夠促進AA患者外周血中DC的增殖（without IL-27組OD值為0.3009±0.0091，with50ng/ml IL-27組OD值為0.3354±0.0077，n=8， P=0.012）；⑵IL-27能夠抑制AA患者外周血中DC的凋亡（without IL-2

5、7組凋亡率為51.750±2.454％，with50ng/mlIL-27組凋亡率為41.750±2.235％，n=12, P=0.006）；⑶IL-27可以上調(diào)AA患者外周血中DC表面共刺激分子CD80、CD86的表達；⑷IL-27可以促進AA患者外周血中DC分泌IL-12、IL-23、IL-27等細胞因子（without IL-27組IL-12、IL-23、IL-27分泌量分別是29.000±1.042pg/ml、60.850±3.5

6、89pg/ml、38.580±1.018pg/ml，with50ng/ml IL-27組IL-12、IL-23、IL-27分泌量分別是36.950±0.869 pg/ml、79.370±3.441 pg/ml、44.710±2.138 pg/ml，P值分別為0.000、0.005、0.003）；⑸IL-27可以促進AA患者DC分泌的IL-12、IL-23、IL-27 mRNA表達（without IL-27組IL-12p35、IL-12

7、p40、IL-23p19、IL-23p40、IL-27p28、IL-27EBI3relative quantitive mRNA expression表達量為1.000±0.071、1.000±0.073、1.000±0.050、1.000±0.073、1.000±0.069、1.000±0.063，with50ng/ml IL-27組IL-12p35、IL-12p40、IL-23p19、IL-23p40、IL-27p28、IL-27E

8、BI3relative quantitive mRNA expression表達量分別為1.695±0.193、1.585±0.254、2.285±0.404、1.585±0.254、4.158±0.320、1.647±0.224，P值分別是0.009、0.037、0.024、0.037、0.000、0.035）；⑹不能證明IL-27促進AA患者外周血中單核細胞的增殖（without IL-27組OD值為0.2238±0.0102，wi

9、th50ng/ml IL-27組OD值為0.2435±0.0116，n=10，P=0.218）；⑺IL-27能夠抑制AA患者外周血中單核細胞的凋亡（without IL-27組凋亡率為42.100±3.734％，with50ng/mlIL-27組凋亡率為27.560±2.328％，n=9, P=0.002）；⑻IL-27可以促進AA患者外周血中單核細胞分泌IL-12、IL-23、IL-27等細胞因子（without IL-27組IL-1

10、2、IL-23、IL-27分泌量分別是25.210±1.591pg/ml、35.540±1.728pg/ml、26.690±1.133pg/ml，with50ng/ml IL-27組IL-12、IL-23、IL-27分泌量分別是31.660±1.032 pg/ml、43.620±2.353pg/ml、37.440±1.640 pg/ml，P值分別為0.007、0.020、0.000）；⑼IL-27可以促進AA患者單核細胞內(nèi)IL-12、I

11、L-23、IL-27 mRNA表達（without IL-27組IL-12p35、IL-12p40、IL-23p19、IL-23p40、IL-27p28、IL-27EBI3relative quantitive mRNA expression表達量為1.000±0.082、1.000±0.075、1.000±0.067、1.000±0.075、1.000±0.061、1.000±0.069，with50ng/ml IL-27組IL-12

12、p35、IL-12p40、IL-23p19、IL-23p40、IL-27p28、IL-27EBI3relative quantitive mRNA expression表達量分別為1.546±0.164、1.780±0.148、1.598±0.151、1.780±0.148、4.114±0.307、2.209±0.340，P值分別是0.046、0.001、0.004、0.001、0.000、0.009）。
　　結(jié)論：IL-27可以