hsBAFF刺激T淋巴細胞功能在增強NK細胞活性中的作用及其機理研究.pdf

1、本文運用細胞培養(yǎng)、流式細胞分析、放射性免疫分析、酶聯(lián)免疫吸附實驗等免疫學(xué)和細胞學(xué)技術(shù)，綜合研究和觀察了hsBAFF對小鼠T淋巴細胞的免疫功能活性及其分泌細胞因子的變化，T淋巴細胞亞群分布和hsBAFF作用于NK細胞活性影響，探討了hsBAFF刺激T淋巴細胞在增強NK細胞活性中的作用及其機理。結(jié)果如下： 1、hsBAFF對小鼠脾細胞中NK細胞活性影響及其與IL-2和IFN-γ關(guān)系研究 研究hsBAFF對小鼠脾細胞中NK細胞

2、活性影響及其與IL-2和IFN-7關(guān)系。分離的脾細胞中NK細胞活性在hsBAFF(0.5，2 and 5 μg/ml)和/或IL-2(5 and 50U/ml)、IFN-γ(20 and 50 ng/ml)處理12和/或24 h后分析。采用Pemoll(R)密度梯度法獲得純的NK細胞。然后加入hsBAFF和/或IL-2、IFN-γ作用12 h后，檢測NK細胞活性。結(jié)果顯示，hsBAFF增強脾細胞中NK細胞活性；IL-2和IFN-γ在hs

3、BAFF增強脾細胞NK細胞活性中的作用。我們發(fā)現(xiàn)單一hsBAFF沒有引起NK細胞活性升高，但有或沒有hsBAFF伴隨IL-2或玳F-γ存在情況下NK細胞活性以劑量依賴方式增強。提示：hsBAFF通過IL-2和/或INF-γ介導(dǎo)NK細胞活性升高，hsBAFF提高脾細胞中NK細胞活性可能與其中含有的T淋巴細胞反應(yīng)有密切的關(guān)系。 2、hsBAFF通過刺激T淋巴細胞功能增強NK細胞活性 分別采用免疫磁珠法和Percoll(R)密

4、度梯度法獲得純的T和B淋巴細胞及NK細胞。將NK細胞分別與混合的T、B細胞，T細胞或B細胞(加2.5μg/ml anti-IgM和B細胞共刺激)共培養(yǎng)，并加入hsBAFF(0.5、2μg/ml)為12和24 h后，檢測NK細胞活性。L另將NK細胞分別與來源于hsBAFF處理12 h的混合T、B細胞，T細胞或B細胞上清液共培養(yǎng)12和24 h后，檢測NK細胞活性。采用放射免疫分析和ELISA檢測培養(yǎng)上清液中IL-2和INF-γ水平。探討hs

5、BAFF通過T、B細胞對NK細胞活性調(diào)節(jié)作用。結(jié)果表明：hsBAFF有效地提高和混合的T、B細胞或T細胞共培養(yǎng)的NK細胞活性，但與B細胞共培養(yǎng)無作用；hsBAFF處理的混合T、B細胞或T細胞培養(yǎng)上清液增強NK細胞活性，但B細胞培養(yǎng)上清液無作用；hsBAFF刺激T細胞產(chǎn)生高水平的IL-2和IFN-γ。提示：hsBAFF增強NK細胞活性關(guān)聯(lián)著T細胞對hsBAFF免疫反應(yīng)，包括它的分泌產(chǎn)物。 3、hsBAFF刺激CD4+細胞功能增強N

6、K細胞活性機理研究 hsBAFF對脾臟T淋巴細胞亞群的影響，探討hsBAFF上調(diào)NK細胞活性的機理。選用區(qū)分CD4+和CD8+T淋巴細胞的雙色抗體，采用流式細胞儀分析檢測脾臟CD4+和CD8+T淋巴細胞亞群分布。結(jié)果顯示：在用hsBAFF(0.5和2 μg/ml)處理12和24h后，CD4+T淋巴細胞比例隨hsBAFF劑量的升高而增高，其中2μg/ml hsBAFF處理組比對照組顯著增高，但各組的CD8+T細胞百分比相近。CD4