血小板和紅細(xì)胞對T淋巴細(xì)胞的調(diào)控作用及其調(diào)控關(guān)系.pdf

1、第一部分血小板和紅細(xì)胞對T淋巴細(xì)胞亞群調(diào)控作用的實(shí)驗(yàn)研究 (一)目的:在體外實(shí)驗(yàn)中,初步探討血小板(PL)和紅細(xì)胞(RBC)對T細(xì)胞亞群的調(diào)控作用及它們之間調(diào)控關(guān)系。 (二)方法 1、按不同的實(shí)驗(yàn)條件將血液反應(yīng)系統(tǒng)分為4組,全血細(xì)胞組、去RBC組、去PL組、去RBC去PL組；以滅活S180(5×109/L)激活組為實(shí)驗(yàn)組,同時(shí)設(shè)置生理鹽水(normal sodium,NS)對照組。 2、FCM測定細(xì)胞表面

2、免疫分子表達(dá)的變化。 (三)結(jié)果 1、各組T細(xì)胞CD4和CD8的變化結(jié)果與去PL組比較,全血細(xì)胞實(shí)驗(yàn)組和對照組淋巴細(xì)胞CD4、CD3+CD4+/CD3+和CD3+CD8+/CD3+均變化無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。與去RBC組比較,全血細(xì)胞組淋巴細(xì)胞CD4和CD3+CD4+/CD3+升高,CD3+CD8+/CD3+降低：實(shí)驗(yàn)組和對照組均。與去RBC去PL組比較,去RBC組淋巴細(xì)胞CD4和CD3+CD4+/CD3+升高,CD3+CD8+

3、/CD3+降低：實(shí)驗(yàn)組、對照組。與去RBC去PL組比較,去PL組淋巴細(xì)胞CD4和CD3+CD4+/CD3+升高,CD3+CD8+/CD3+降低：實(shí)驗(yàn)組和對照組均。全血細(xì)胞組、去PL組和去RBC去PL組中CD4和CD8均呈負(fù)相關(guān)；而去RBC組CD4和CD8相關(guān)性無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 2、各組PLCD59、PLCD62P,和RBCCD35的變化結(jié)果與去RBC組比較,全血細(xì)胞對照組PLCD59表達(dá)下降,實(shí)驗(yàn)組變化無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；全血細(xì)胞實(shí)驗(yàn)組

4、和對照組PLCD62P表達(dá)均升高。與去PL組比較,全血細(xì)胞實(shí)驗(yàn)組和對照組RBCCD35表達(dá)下降。與對照組比較,全血細(xì)胞實(shí)驗(yàn)組中血小板PLCD62P表達(dá)升高,紅細(xì)胞RBCCD35下降。 (四)結(jié)論：血小板是啟動(dòng)T細(xì)胞免疫平衡動(dòng)態(tài)變化的原因；而紅細(xì)胞則維持其動(dòng)態(tài)平衡。 第二部分血小板免疫失衡血液系統(tǒng)的構(gòu)建及血小板和紅細(xì)胞對淋巴細(xì)胞CD4+CD25+表達(dá)的影響 (一)目的 1、選擇合適的抗原；構(gòu)建血小板免疫失衡

5、的血液免疫反應(yīng)系統(tǒng)。 2、應(yīng)用實(shí)驗(yàn)新體系,初步研究血小板(PL)和紅細(xì)胞(RBC)對淋巴細(xì)胞CD4+CD25+表達(dá)的影響。 (二)方法 1、選取合適的抗原： (1)瑞氏染色,光鏡下觀察酵母菌和S180濃度變化對血小板聚集的影響。 (2)瑞氏染色,光鏡下觀察不同補(bǔ)體活化途徑被阻斷,對酵母菌和S180誘導(dǎo)血小板聚集的影響。 (3)應(yīng)用酵母菌、S180、活化補(bǔ)體包被的酵母菌和活化補(bǔ)體包被的S18

6、0作為誘導(dǎo)劑,血小板聚集儀測定血小板聚集曲線的變化。 2、血小板免疫失衡血液系統(tǒng)的構(gòu)建：應(yīng)用選取的抗原,激活血液免疫系統(tǒng)。 3、FCM測定淋巴細(xì)胞CD4+CD25+表達(dá)水平的變化。 (三)結(jié)果 1、酵母菌和S180均可通過激活補(bǔ)體而誘導(dǎo)血小板黏附和聚集等活性變化,并與其劑量相關(guān)：酵母菌(2×109/L、4×109/L)和S180(5×109/L、1×1010/L)均不能引起血小扳聚集；酵母菌(8×109/

7、L、16×109/L)和S180(2×1010/L、4×1010/L)均可引起血小板聚集。 2、血小板聚集儀測定5min,酵母菌(4×109/L)和S180(4×1010/L)均不能誘導(dǎo)血小板聚集；補(bǔ)體包被酵母菌(4×109/L)和補(bǔ)體包被S180(4×1010/L)均可立即誘導(dǎo)血小板聚集。 3、血小板免疫失衡血液系統(tǒng)的構(gòu)建分別用低濃度S180(5×109/L)和高濃度S180(3×1010/L)作為抗原,激活血液免疫反

8、應(yīng)系統(tǒng)同時(shí)設(shè)置NS用刺激的血液免疫反應(yīng)系統(tǒng)作對照；即：同時(shí)設(shè)置NS刺激對照血液免疫反應(yīng)系統(tǒng)、低濃度抗原LS180(5×109/L S180)抗原激活血液免疫反應(yīng)實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)和高濃度抗原HS180(3×1010/L S180)激活血液免疫反應(yīng)實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)。 4、各組淋巴細(xì)胞CD4+CD25+表達(dá)水平比較與去PL組比較,全血細(xì)胞對照組和LS180實(shí)驗(yàn)組均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義、HS180實(shí)驗(yàn)組升高。與去RBC組比較,全血細(xì)胞對照組和LS180實(shí)驗(yàn)組均

9、降低,但HDS180實(shí)驗(yàn)組升高。與去RBC去PL組比較,去RBC組對照組和LS180實(shí)驗(yàn)組變化均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義、LS180實(shí)驗(yàn)組降低。與去RBC去PL組比較,去PL組對照組、LS180實(shí)驗(yàn)組和LS180實(shí)驗(yàn)組均降低。 (四)結(jié)論 1、建立了血小板免疫失衡血液系統(tǒng)。 2、紅細(xì)胞可雙向調(diào)節(jié)淋巴細(xì)胞CDM+CD25+的表達(dá)水平,血小板聚集變化是紅細(xì)胞發(fā)揮正向調(diào)節(jié)作用的關(guān)鍵原因。 第三部分血小板和紅細(xì)胞對Th細(xì)胞向

10、Th1型或Th2型分化方向偏移的影響 (一)目的：研究血小板和紅細(xì)胞對Th細(xì)胞向Th1型或Th2型分化方向偏移的影響。 (二)方法：采用ELASE法測定分泌IFN-r和IL-10的變化情況。 (三)結(jié)果 1、各組IFN-r/IL-10的變化結(jié)果與去PL組比較,全血細(xì)胞對照組和LS180實(shí)驗(yàn)組均變化無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),LS180實(shí)驗(yàn)組降低。全血細(xì)胞組與去RBC組比較：對照組、LS180實(shí)驗(yàn)組和LS

11、180實(shí)驗(yàn)組均變化無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。去RBC組與去RBC去PL組比較：對照組和LS180實(shí)驗(yàn)組升高,但LS180實(shí)驗(yàn)組降低。與去RBC去PL組比較,去PL組對照組和LS180實(shí)驗(yàn)組升高、LS180實(shí)驗(yàn)組變化無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 2、各組IFN-r的變化結(jié)果與去PL組比較,全血細(xì)胞對照組和LS180實(shí)驗(yàn)組升高、LS180實(shí)驗(yàn)組變化無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。與去RBC組比較,全血胞組對照組和LS180實(shí)驗(yàn)組均變化無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,LS180實(shí)驗(yàn)組升高。與去R

12、BC去PL組比較,去RBC組對照組升高,LS180實(shí)驗(yàn)組變化無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,LS180實(shí)驗(yàn)組下降。與去RBC去PL組比較,去PL組對照組升高,LS180實(shí)驗(yàn)組和LS180實(shí)驗(yàn)組均變化無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 3、各組IL-10的變化結(jié)果與去PL組比較,全血細(xì)胞全血細(xì)胞組對照組變化無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,LS180實(shí)驗(yàn)組和LS180實(shí)驗(yàn)組升高。與去RBC組比較,全血細(xì)胞對照組和LS180實(shí)驗(yàn)組變化均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。LS180實(shí)驗(yàn)組升高。與去RBC去PL組