從化市小兒呼吸道人類偏肺病毒感染的臨床與分子流行病學(xué)特征.pdf

1、背景與目的：呼吸道感染（respiratory tract infection，RTI）是兒童發(fā)病和死亡的一個(gè)重要原因。呼吸道合胞病毒（respiratory syncytial virus，RSV）、流感病毒（influenza virus，F(xiàn)lu）、副流感病毒（parainfluenza virus，PIV）是病毒性呼吸道感染的病原體。即便運(yùn)用敏感有效的診斷方法，仍有1/3病例的感染源尚不明確，提示存在未知或尚未被認(rèn)識(shí)的病原體。20

2、01年，van den Hoogen BG從荷蘭呼吸道感染患兒氣道分泌物中分離出一種新的呼吸道病毒。根據(jù)病毒學(xué)數(shù)據(jù)、序列同源性和基因結(jié)構(gòu)分析表明該病毒屬于副黏病毒科肺病毒亞科偏肺病毒屬，被命名為人類偏肺病毒（human metapenumovirus，hMPV）。該病毒全球分布與流行，歐洲、北美、南美、澳大利亞、亞洲、非洲等地方先后報(bào)道了大量有關(guān)hMPV感染的臨床和分子流行病學(xué)特征的數(shù)據(jù)。雖然各個(gè)年齡組均可檢測到hMPV感染，嬰幼兒似乎

3、對hMPV特別易感，疾病診斷包括上、下呼吸道感染。目前，尚未有關(guān)從化市hMPV感染的臨床與分子流行病學(xué)特征的報(bào)道。研究從化市hMPV感染的臨床與分子流行病學(xué)特征對于了解從化市hMPV感染及防治具有重要的意義。本研究的目的：（1）研究從化市小兒呼吸道hMPV感染的臨床與分子流行病學(xué)特征。（2）探討hMPV感染與小兒毛細(xì)支氣管炎、支氣管肺炎、支氣管炎、支氣管哮喘的關(guān)系。（3）通過對hMPV感染陽性PCR產(chǎn)物進(jìn)行基因測序及種系進(jìn)化分析，探討從

4、化市小兒呼吸道感染的hMPV分離株與其他地區(qū)hMPV分離株的同源性及基因分型的差異。（4）了解其他常見呼吸道病毒感染的臨床與分子流行病學(xué)特征。
　　 材料與方法：（1）標(biāo)本收集：收集2008年12月至2009年10月從化中心醫(yī)院6歲以下呼吸道感染住院患兒氣道分泌物標(biāo)本260例。（2）采用巢式聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（nested PCR）檢測呼吸道分泌物hMPV感染，兩輪PCR擴(kuò)增產(chǎn)物（hMPV-1，hMPV-2）經(jīng)2％瓊脂糖凝膠電泳后成

5、像并存檔。（3）采用多重PCR（multiple PCR）檢測呼吸道合胞病毒A、B型（RSV-A，RSV-B），流感病毒甲、乙型（Flu-A，F(xiàn)lu-B），副流感病毒1、2、3型（PIV-1，PIV-2，PIV-3），PCR產(chǎn)物經(jīng)2％瓊脂糖凝膠電泳后成像并存檔。（4）隨機(jī)挑選7例hMPV-1陽性PCR產(chǎn)物進(jìn)行基因測序，測序工作由上海英駿生物技術(shù)有限公司（invitrogen）完成。（5）所有測序結(jié)果與GenBank中的序列進(jìn)行比對，分析

6、同源性；多重序列比對采用Clustal W軟件；種系進(jìn)化分析采用DNAStar軟件。
　　 結(jié)果：（1）hMPV-1陽性PCR產(chǎn)物經(jīng)2％瓊脂糖凝膠電泳后成像并存檔，陽性標(biāo)本和陽性對照于450bp～600bp間各出現(xiàn)一條目的條帶，與預(yù)期條帶大小一致（462bp）；hMPV-2陽性PCR產(chǎn)物經(jīng)2％瓊脂糖凝膠電泳后成像，陽性標(biāo)本和陽性對照于400bp～500bp間各出現(xiàn)一條目的條帶，與預(yù)期條帶大小一致（431bp）。（2）hMPV-1

7、男性陽性標(biāo)本17例，陽性率 9.83％；女性標(biāo)本4例，陽性率4.60％。男、女感染陽性率比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=2.132，P＞0.05）；hMPV-2男性陽性標(biāo)本36例，陽性率 20.81％；女性標(biāo)本12例，陽性率13.79％。男、女感染陽性率比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=2.132，P＞0.05）。hMPV-2男、女感染陽性率與 hMPV-1比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=8.04，P＜0.05; χ2=4.41，P＜0.05）。hM

8、PV-1發(fā)病年齡中年齡＜6個(gè)月組陽性率7.51％；6個(gè)月＜年齡≦1歲組陽性率13.11％，兩個(gè)年齡組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；hMPV-2年齡＜6個(gè)月組陽性率13.87％；6個(gè)月＜年齡≦1歲組陽性率31.15％；1歲＜年齡≦3歲組陽性率20.83％。三個(gè)年齡組陽性率比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。hMPV-2發(fā)病年齡中1歲＜年齡≦3歲組陽性率與hMPV-1比較有顯著性差異（χ2=5.76，P＜0.05）。hMPV感染3、4月份發(fā)病率較高，春季高發(fā)，發(fā)

9、病高峰期與RSV感染有重疊。（3）hMPV-1陽性標(biāo)本21例，陽性率為8.08％；hMPV-2陽性標(biāo)本48例，陽性率為18.46％。兩輪擴(kuò)增產(chǎn)物陽性率比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=54.14，P＜0.05）。hMPV感染臨床表現(xiàn)以咳嗽和喘息為主；hMPV-1感染患兒喘息癥狀及中性粒細(xì)胞百分比(％)與PIV-3感染比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=4.219，P＜0.05；t=-2.424，P＜0.05）。hMPV-2中性粒細(xì)胞百分比（N％）與P

10、IV-3比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=-2.26，P＜0.05）。hMPV-1陽性患兒診斷為LRTI，其中毛細(xì)支氣管炎12例（57.14％），支氣管肺炎3例（14.29％），支氣管炎6例（28.57％）。hMPV-2陽性患兒診斷包括上、下呼吸道感染。上呼吸道感染表現(xiàn)為喉炎1例（2.08％），下呼吸道感染表現(xiàn)為毛細(xì)支氣管炎25例 (52.08％)，支氣管炎14例 (29.17％)，支氣管肺炎6例 (12.5％)，支氣管哮喘2例 (4.17％)

11、。（4）其他常見呼吸道病毒感染檢測陽性126例，陽性率為48.46％；RSV-A感染陽性標(biāo)本18例，陽性率6.92％；RSV-B感染陽性標(biāo)本27例，陽性率10.83％。RSV陽性標(biāo)本共45例，總陽性率17.31％。臨床表現(xiàn)以咳嗽、喘息、發(fā)熱、憋氣為主。臨床診斷為LRTI。RSV感染春季高發(fā)；Flu-A感染陽性標(biāo)本4例，陽性率1.54％；Flu-B感染陽性標(biāo)本10例，陽性率3.85％；Flu陽性標(biāo)本共14例，總陽性率為5.38％；臨床表現(xiàn)

12、以咳嗽、喘息、發(fā)熱為主。臨床診斷以LRTI為主，其中1例Flu-A陽性患兒診斷為喉炎，2例Flu-B陽性患兒診斷為支氣管哮喘。Flu感染春季高發(fā)；PIV-3感染陽性標(biāo)本67例，陽性率25.77％；未檢測到PIV-1、PIV-2型感染。臨床表現(xiàn)為咳嗽、喘息、發(fā)熱、憋氣、咳痰為主。臨床診斷以LRTI為主，其中2例PIV-3陽性患兒診斷為喉炎。PIV-3感染春季高發(fā)；hMPV-1中其他常見病毒混合感染共19例，混合感染率15.08％。其中RS

13、V-B/Flu-B 1例，RSV-B/PIV-3 14例，F(xiàn)lu-A/PIV-3 1例，F(xiàn)lu-B/PIV-3 3例；hMPV-2中其他常見病毒混合感染17例，混合感染率為13.49％。其中RSV-B/Flu-B 1例，RSV-B/PIV-3 12例，F(xiàn)lu-A/PIV-3 1例，F(xiàn)lu-B/PIV-3 3例；兩者比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。（5）hMPV-1陽性標(biāo)本中合并其他病毒感染7例，混合感染率為33.33％，其中hMPV/RSV-B

14、1例，hMPV/Flu-B 3例，hMPV/PIV-3 3例；未見多重感染；hMPV-2陽性標(biāo)本中合并其他病毒感染17例，混合感染率為35.42％，其中hMPV/RSV-A 4例，hMPV/RSV-B 1例，hMPV/Flu-B 3例，hMPV/PIV-3 7例。三重病毒感染hMPV/RSV-B/PIV-3 2例(11.76％)。hMPV-1與hMPV-2病毒混合感染率比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。hMPV混合感染患兒臨床表現(xiàn)以咳嗽、喘息為主，

15、臨床診斷為LRTI。（6）hMPV-1陽性PCR產(chǎn)物測序結(jié)果與GenBank中序列進(jìn)行比對，與序列HMPVgz01 （GenBank acession: GQ153651.1）及BJ（GenBank acession: DQ843659.1）局部相似性為98％～100％，具有同源性。多重序列比對及進(jìn)化樹分析表明7例測序標(biāo)本基因型均為A型中A2亞型。
　　 結(jié)論：（1）從化市hMPV感染臨床及分子流行病學(xué)特征：hMPV感染陽性標(biāo)本

16、48例，感染率為18.46％，感染性別及年齡組無差異。hMPV感染具有明顯季節(jié)性，3、4月份發(fā)病率高，冬、春季高發(fā)。臨床癥狀以咳嗽、喘息為主，臨床診斷為下呼吸道感染，表現(xiàn)為毛細(xì)支氣管炎、支氣管肺炎、支氣管炎。hMPV是引起小兒病毒性下呼吸道感染的一種重要病原體。（2）從化市hMPV合并其他病毒感染臨床及流行病學(xué)特征：48例hMPV感染陽性標(biāo)本中，合并其他病毒感染17例，合并感染率為35.42％。臨床表現(xiàn)及流行病學(xué)特征與hMPV感染相似。

17、（3）從化市hMPV 感染基因測序及種系進(jìn)化分析：hMPV-1測序結(jié)果與HMPVgz01（GenBank accession：GQ153651.1）及BJ1887（GenBank accession：DQ843659.1）局部相似性為98％～100％，具有同源性。種系進(jìn)化分析表明7例測序標(biāo)本基因型均為A型中A2亞型。（4）其他常見呼吸道病毒感染臨床及分子流行病學(xué)特征：其他常見呼吸道病毒感染陽性標(biāo)本126例，陽性率48.46％。PIV-3