廣州兒童秋冬腹瀉中人類杯狀病毒分子流行病學(xué)、臨床特征及感染的危險(xiǎn)因素研究.pdf

1、研究背景、目的、意義人類杯狀病毒(HumanCalicivirus，HuCV)包括諾瓦克樣病毒(Norovirus，NVsorNorwalk-likevirus，NLVs)和扎幌樣病毒(Sappovirus，SVsorSapporo-likevirus，SLVs)，是導(dǎo)致人類急性胃腸炎的常見病原體，也是僅次于輪狀病毒導(dǎo)致兒童急性腹瀉的重要病原體。 NLVs與SLVs分別是在1968年、1977年的美國俄亥俄州的Norwalk地區(qū)

2、及日本扎幌地區(qū)發(fā)現(xiàn)的。此后，在世界多個(gè)國家均檢測到此兩類病毒，NLVs又曾被稱為小RNA病毒、小圓結(jié)構(gòu)病毒。1998年國際病毒分類委員會(huì)根據(jù)病毒形態(tài)、結(jié)構(gòu)、抗原特性、基因序列和遺傳進(jìn)化分析等研究成果，將此兩類病毒歸入杯狀病毒科。HuCV毒株間具有很大的核苷酸序列多樣性，依據(jù)基因結(jié)構(gòu)中RNA多聚酶及殼蛋白區(qū)域序列的差異，將NLVs分為三個(gè)遺傳組(geneticgroup)，每一遺傳組又分別包括多個(gè)不同的群(cluster)。SLVs分為三

3、個(gè)基因型，五個(gè)基因亞型。Farkas等最近研究表明，SLVs存在更多的基因型與基因亞型，表明了HuCV基因的多樣性。 長期以來，由于檢測方法的局限，對HuCV給人類造成的危害及其嚴(yán)重程度缺乏正確的認(rèn)識(shí)，常常低估其危害。1992年以美籍學(xué)者JiangXi為首的研究組建立并發(fā)展了RT-PCR方法檢測HuCV后，HuCV所致疾病的危害性和嚴(yán)重性越來越被研究者重視。 HuCV呈全球流行趨勢，已成為人類非菌性急性胃腸炎暴發(fā)和散發(fā)的

4、最主要原因之一。在1997年7月-2000年6月美國發(fā)生的233起非菌性急性胃腸炎的暴發(fā)中確認(rèn)其中的93％是由NLVs所致。在芬蘭2398名2-24月齡兒童為期兩年的前瞻性非菌性急性胃腸炎病原學(xué)研究中發(fā)現(xiàn)HuCV的檢出率為29％，與輪狀病毒的檢出率一致。在荷蘭1998年12月至1999年12月進(jìn)行的隊(duì)列研究表明腹瀉患者中HuCV陽性率為17％。 我國對于HuCV的研究則起步較晚，最早是方肇寅等在1990-1991年我國河南急性腹

5、瀉門診收集的腹瀉患兒糞便中檢出兩例NLVs。之后，在我國的北京、長春、河北、廣州等地區(qū)均檢測出HuCV，其陽性率分別為24.9％、16％、31.6％、9.1％。最近資料顯示2003年秋冬季在廣州的中學(xué)、小學(xué)、幼兒園均發(fā)生了NLVs胃腸炎的暴發(fā)。這些研究資料表明我國HuCV的感染已非常普遍，是僅次于輪狀病毒導(dǎo)致兒童腹瀉的病原體，并且NLV所引起急性胃腸炎的暴發(fā)也已較多見。 綜上所述，HuCV引起的感染在我國北方已非常普遍，在我國南

6、方廣州也已檢測到NLVs的存在，并且導(dǎo)致了多起急性胃腸炎的暴發(fā)，但目前，國內(nèi)研究主要側(cè)重病原、抗體的檢測，故有關(guān)結(jié)果缺乏系統(tǒng)、全面和代表性，同時(shí)也缺乏其它流行病學(xué)及臨床有關(guān)資料。因此，本研究擬在明確廣州地區(qū)存在HuCV感染的基礎(chǔ)上進(jìn)一步研究HuCV感染的分布特征、感染頻率、流行毒株的分子生物學(xué)特點(diǎn)、主要臨床特點(diǎn)及危險(xiǎn)因素，為檢測試劑的開發(fā)、有效疫苗的研制等研究打下基礎(chǔ)和創(chuàng)造條件。研究結(jié)果將為人們更清楚、更明確的認(rèn)識(shí)HuCV感染的危害性和

7、嚴(yán)重性提供信息，為廣州地區(qū)制定有針對性的防治對策奠定理論依據(jù)，同時(shí)也豐富了我國對HuCV感染的有關(guān)理論和信息。因此，開展本研究具有現(xiàn)實(shí)意義和緊迫性。 研究方法收集南方醫(yī)院兒科門診及病房臨床診斷為病毒性腹瀉患兒的糞便標(biāo)本，并同時(shí)進(jìn)行調(diào)查，填寫調(diào)查表，電話隨訪完善調(diào)查表。對收集的標(biāo)本采用ELISA檢測輪狀病毒(RV)，檢測RV陰性標(biāo)本采用RT-PCR檢測NLVs，RV及NLVs均為陰性標(biāo)本采用RT-PCR檢測SLVs。隨機(jī)抽取部分檢

8、測HuCV陽性標(biāo)本進(jìn)行純化、測序，并采用DNAstar、Treeview等軟件進(jìn)行序列分析、繪制進(jìn)化樹。對調(diào)查表資料用統(tǒng)計(jì)軟件包SPSS10.0建立數(shù)據(jù)庫，采用1：1配對病例(NLVs)一病例(RV)比較研究及1：1配對病例對照研究分析NLVs感染的臨床特點(diǎn)及危險(xiǎn)因素。對于NLVs病例與輪狀病毒病例的對比研究采用X2檢驗(yàn)、t檢驗(yàn)，對于危險(xiǎn)因素分析采用1：1單因素及多因素條件Logistic回歸分析。 研究結(jié)果1.在2003年10

9、月-2004年1月及2004年10月-2005年1月兩階段共收集到腹瀉患兒糞便標(biāo)本648份。檢測出輪狀病毒陽性標(biāo)本339份，陽性率52.31％(339/648)，NLVs陽性標(biāo)本80份，陽性率12.35％(80/648)，SLVs陽性標(biāo)本2份，陽性率0.87％(2/229)。本次研究的四個(gè)月中NLVs均有較高的陽性率，分別為11.74％(10月)、14.16％(11月)、9.09％(12月)、13.95％(1月)，各月陽性率經(jīng)X2檢驗(yàn)無

10、顯著性差異，但2004年10月比2003年10月NLVs檢出率要高(X2檢驗(yàn)，P＜0.05)。本研究中NLVs腹瀉患兒主要分布于2歲以下(占檢測陽性數(shù)的88.75％)，其中又以6月-12月、1歲-2歲兩組陽性率最高(共占78.75％)，年齡最小為25天，最大為4歲半。NLVs陽性患兒性別分布存在著明顯差異，但這種差異的原因是由于總體腹瀉患兒性別比例的差異所導(dǎo)致。兩例扎幌樣病毒陽性患兒分別為11月女孩、2歲半男孩。 2.隨機(jī)抽取2

11、2株NLVs進(jìn)行測序分析，結(jié)果有6株屬于GⅡ-3群，15株屬于GⅡ-4群，1株尚不能確定其所屬群。在2003年GⅡ-3群、GⅡ-4群相當(dāng)(各為5株)，而2004年以GⅡ-4群為主(10株GⅡ-4，僅有1株GⅡ-3)。在測序的22株NLVs中無GⅠ型NLVs。兩株SLVs經(jīng)測序分析，均屬于GⅠ-1群。 3.NLVs感染性腹瀉的主要癥狀為嘔吐、腹瀉、發(fā)熱。其臨床特征有別于RV感染性腹瀉，前者嘔吐癥狀最早出現(xiàn)者居多(62.82％)，并

12、且有嘔吐癥狀者要多于后者(分別為84.62％、67.95％，X2檢驗(yàn)，P＜0.05)。而RV腹瀉患兒最早出現(xiàn)的癥狀以腹瀉為主(65.38％)。發(fā)熱、最高溫度、發(fā)熱天數(shù)、腹瀉天數(shù)、是否輸液治療及就診次數(shù)六項(xiàng)均是RV感染患兒高于NLVs感染患兒，說明總體上RV腹瀉患兒臨床癥狀比NLVs腹瀉患兒臨床癥狀較嚴(yán)重。但NLVs感染性腹瀉所造成的家庭經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)不容忽視，直接花費(fèi)平均約為415元。NLVs與RV腹瀉患兒感染的可能危險(xiǎn)因素比較，結(jié)果各項(xiàng)均無

13、顯著性差異。 對NLVs感染性腹瀉可能的危險(xiǎn)因素進(jìn)行單因素及多因素條件Logistic回歸分析，結(jié)果最終篩選出4項(xiàng)危險(xiǎn)因素，分別是吃生冷食品、與腹瀉患者接觸、吮手習(xí)慣及較少洗手。同時(shí)還對RV感染的危險(xiǎn)因素進(jìn)行了對比研究，結(jié)果證實(shí)RV與NLVs具有相同的危險(xiǎn)因素。 結(jié)論證實(shí)NLVs是引起廣州地區(qū)兒童秋冬季腹瀉的重要病原體，具有較高的發(fā)病率，并且我國南方地區(qū)發(fā)病高峰期可能早于北方地區(qū)；HuCV導(dǎo)致兒童腹瀉發(fā)生的年齡較小，主要

14、分布于2歲以下；GⅡ-3群、GⅡ-4群均是廣州秋冬季的流行優(yōu)勢株，但在不同的時(shí)間段可能存在不同的流行優(yōu)勢株，GⅠ型NLVs在本地的流行居次要位置；證實(shí)廣州地區(qū)存在SLVs引起的腹瀉，但流行季節(jié)尚不能確定；兩株SLVs基因型與我國北方檢出的一株SLVs基因型不同，說明我國存在著不同基因型的SLVs，并且不同的地區(qū)可能存在的SLVs基因型也不相同。 NLVs感染性腹瀉的臨床特征不同于RV感染性腹瀉；RV感染性腹瀉臨床癥狀要比NLVs