痰熱清注射液體內(nèi)代謝與相互作用研究.pdf

1、中藥注射液是中醫(yī)藥在長期發(fā)展的基礎(chǔ)上形成的一種新劑型，由于其自身特點，中藥注射液成分復(fù)雜，臨床適應(yīng)癥較多，在發(fā)展過程中也出現(xiàn)過一些影響重大的不良反應(yīng)事件。一些中藥注射液的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)落后，缺乏控制其質(zhì)量穩(wěn)定性的評價指標(biāo)，物質(zhì)研究基礎(chǔ)不足;藥物進(jìn)入體內(nèi)的入血成分不明確，藥動學(xué)特征不夠清晰，藥物之間相互作用研究并不多見。這些不足大大影響了中藥注射液在臨床的安全有效應(yīng)用，難以適應(yīng)中藥現(xiàn)代化要求，因此提高中藥注射液的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)與用藥安全性勢在必行。<

2、br>　　 痰熱清注射液由黃芩、熊膽粉、山羊角、金銀花和連翹組成，主要用于風(fēng)溫肺熱病痰熱阻肺證，是治療急性支氣管炎和急性肺炎等疾病的中藥制劑，被廣泛應(yīng)用于呼吸科、兒科、外科、腫瘤科等。目前痰熱清注射液缺少權(quán)威的質(zhì)量控制體系，其體內(nèi)過程也并不清楚，對其它藥物的疑似影響也有報道。因此本文以痰熱清注射液為研究對象，以HPLC、LC-MS/MS、LC-Q-TOF/MS聯(lián)用技術(shù)為主要監(jiān)測手段，在對痰熱清注射液質(zhì)量控制研究和痰熱清注射液主要成分及

3、西羅莫司體內(nèi)定性定量分析方法建立的基礎(chǔ)上，深入探討痰熱清注射液體內(nèi)代謝動力學(xué)特征和及與西羅莫司的相互作用機制，具體內(nèi)容包括:
　　 1、采用HPLC-DAD-ELSD技術(shù)對11批不同批次的痰熱清注射液建立了雙譜指紋圖譜，并進(jìn)行了相似度分析。在此基礎(chǔ)上以LC-Q-TOF/MS技術(shù)對痰熱清注射液的化學(xué)成分進(jìn)行了鑒別，共鑒別出53種化合物，并根據(jù)二級質(zhì)譜特征離子區(qū)分了部分同分異構(gòu)體，同時對指紋圖譜的部分峰進(jìn)行了指認(rèn)，使其代表性增強。對

4、痰熱清注射液中的主要成分綠原酸、咖啡酸、黃芩苷、熊去氧膽酸與鵝去氧膽酸建立了HPLC-DAD-ELSD含量測定方法，并進(jìn)行了方法學(xué)考察。結(jié)果表明各成分線性關(guān)系良好(r＞0.99)，日內(nèi)、日間精密度均小于5％，重現(xiàn)性好，精密度高，成功用于不同批次痰熱清注射液的測定，為更好地控制痰熱清注射液質(zhì)量提供了科學(xué)依據(jù)，并為體內(nèi)藥代動力學(xué)研究所需的質(zhì)量穩(wěn)定可靠的供試樣品提供了保證。
　　 2、采用LC-Q-TOF/MS技術(shù)對痰熱清注射液的入血

5、成分進(jìn)行了鑒定，共鑒別出20余種入血成分。再采用LC-MS/MS技術(shù)建立了對痰熱清注射液中5種主要活性成分，即綠原酸、咖啡酸、黃芩苷、熊去氧膽酸與鵝去氧膽酸，在大鼠血漿中的定量分析方法。采用蛋白沉淀為血漿樣品前處理條件，沉淀劑為甲醇:乙腈=3∶1，以蘆丁、葛根素為內(nèi)標(biāo)，色譜分析采用Zorbax SB-C18柱(3.5μm，100mm×2.1 mm)，流動相為乙腈與水（含0.1％甲酸），采用梯度洗脫，流速為0.3 mL·min-1，柱溫為

6、35℃。運用Agilent G6410A型串聯(lián)質(zhì)譜的多反應(yīng)監(jiān)測(MRM)模式負(fù)離子檢測，并進(jìn)行了系統(tǒng)的方法學(xué)評價。結(jié)果顯示，在各自的生物樣品濃度范圍內(nèi)，均呈良好線性，r＞0.99;各成分的線性范圍分別為:30～14933ng·mL-1，27～13333ng·mL-1，50～50333ng·mL-1，550～55000ng·mL-1，480～48000ng· mL-1，日內(nèi)、日間精密度均小于14％，提取回收率在70％～105％之間。該方法

7、操作簡單，選擇性好，靈敏度高，成功用于痰熱清注射液大鼠血漿的藥代動力學(xué)研究，為臨床合理用藥提供參考依據(jù)。最后以LC-Q-TOF/MS技術(shù)對痰熱清注射液主要入血成分的代謝產(chǎn)物進(jìn)行了初步鑒別，初步明確了痰熱清注射液在體內(nèi)的代謝特征。
　　 3、本章建立了一種簡單、快速、靈敏的LC-MS/MS方法來測定大鼠全血中西羅莫司的濃度。蛋白沉淀法可有效提取全血中的西羅莫司，內(nèi)源性雜質(zhì)不干擾測定，標(biāo)準(zhǔn)曲線線性關(guān)系良好(r＞0.99)，最低定量限

8、為2.5ng·mL-1，高、中、低3個濃度下測得各成分的日內(nèi)和日間精密度RSD均低予15％，相對回收率、絕對回收率均符合要求。本方法各項指標(biāo)符合生物樣品分析測定要求，且操作簡單，選擇性好，靈敏度高，適用于痰熱清注射液與西羅莫司合并用藥后的藥代動力學(xué)研究。從整體藥代動力學(xué)角度上考察了在不同時間注射等量痰熱清注射液及在相同時間注射不同劑量痰熱清注射液對西羅莫司在大鼠體內(nèi)過程的影響，結(jié)果顯示痰熱清注射液在體內(nèi)對西羅莫司都表現(xiàn)為Cmax升高，A

9、UC0-t增大，對其消除相并沒有明顯影響。
　　 4、采用人肝微粒體體外孵育實驗，系統(tǒng)考察了痰熱清注射液及5個主要活性成分對CYP1A2、CYP2C9、CYP2C19、CYP2D6、CYP3A4和CYP2E1這6種酶活性是否產(chǎn)生抑制作用，從而影響西羅莫司在肝微粒體的代謝。并以正己烷、二氯甲烷、乙酸乙酯及水對痰熱清注射液進(jìn)行了液液萃取，再以指紋圖譜的液相條件為基礎(chǔ)，以不同時間間隔對痰熱清注射液進(jìn)行了分段收集。結(jié)果顯示，痰熱清注射液