131I-K237的制備及在體外對前列腺癌細(xì)胞影響的實驗研究.pdf

1、目的:探索131I標(biāo)記多肽K237,獲得放射化學(xué)純度高于95％的131I-K237的最佳條件,研究標(biāo)記產(chǎn)物的體外穩(wěn)定性及生物學(xué)活性。研究鑒定131I-K237對前列腺癌LNCaP細(xì)胞的體外治療作用。
　　方法:應(yīng)用Iodogen法對K237進(jìn)行131I標(biāo)記,采用正交實驗篩選最佳標(biāo)記條件。用高效液相色譜儀(HPLC)聯(lián)合薄層層析法(TLC)測定標(biāo)記率及放射化學(xué)純度,SephadexG25凝膠層析柱分離純化131I-K237。將分離純

2、化的131I-K237(放射化學(xué)純度大于95%)分別放置于室溫及37℃水浴箱,于不同時間測定其放射化學(xué)純度以觀察其穩(wěn)定性。應(yīng)用CCK-8法進(jìn)行人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVEC)增殖抑制實驗,分別計算K237及131I-K237對HUVEC的抑制率,判定131I-K237的生物學(xué)活性。體外培養(yǎng)前列腺癌LNCaP細(xì)胞,分別加入不同放射性活度131I-K237、相同濃度K237和空白對照組干預(yù)48h后,應(yīng)用光學(xué)顯微鏡、熒光顯微鏡、核酸凝膠電泳、流

3、式細(xì)胞分析來鑒定131I-K237對LNCaP細(xì)胞的治療作用。
　　結(jié)果:最佳標(biāo)記條件中,K237100μg與Iodogen50μg,在37℃條件下反應(yīng)時間40min,標(biāo)記率可達(dá)70%以上。經(jīng)SephadexG25層析柱分離純化后,放射化學(xué)純度可達(dá)95%以上。穩(wěn)定性實驗結(jié)果表明,131I-K237在體外放置24h后,其放射化學(xué)純度任>90%。131I-K237和K237對HUVEC細(xì)胞增殖的抑制率差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05),

4、說明K237被131I標(biāo)記后,其生物學(xué)活性未發(fā)生改變。131I-K237對LNCaP細(xì)胞治療作用鑒定結(jié)果:光鏡下可以觀察到凋亡細(xì)胞形態(tài)。熒光顯微鏡下凋亡細(xì)胞呈團(tuán)狀或碎塊狀致密濃染的藍(lán)色強(qiáng)熒光。DNA電泳為典型的“階梯狀”條帶。流式細(xì)胞分析結(jié)果131I-K237與K237都對LNCaP細(xì)胞具有誘導(dǎo)凋亡作用,但131I-K237的誘導(dǎo)作用明顯高于K237,且凋亡率與加入131I-K237放射性活度呈正相關(guān)。
　　結(jié)論:Iodogen法