PPAR-γ激動劑調(diào)節(jié)腎素-血管緊張素和脂聯(lián)素系統(tǒng)的心血管保護(hù)機(jī)制.pdf

1、目的：在體和離體實(shí)驗(yàn)探討過氧化物酶增殖體活化受體-γ(Peroxisome proliferators activated receptorγ，PPARγ)激活對腎素-血管緊張素系統(tǒng)(Renin-angiotensin system，RAS)的影響及其血管保護(hù)作用。
　　 材料與方法：
　　 (1)實(shí)驗(yàn)動物研究38只體重190～210 g雄性Wistar-Kyoto鼠隨機(jī)分為4組：普通飼料組(Con組n=8)；高膽固醇組

2、(Cho組，n=10)，喂高膽固醇飼料；羅格列酮干預(yù)組(Ros組，n=10)，高膽固醇飼料加羅格列酮(4 mg.Kg-1.day-1)；厄貝沙坦干預(yù)組(Irb組，n=10)，高膽固醇飼料加厄貝沙坦(50 mg.Kg-1.day-1)。高膽固醇適應(yīng)性飼養(yǎng)一個月后開始藥物干預(yù)，持續(xù)5個月。處死鼠前禁食12 h，稱體重，左心室穿刺采集血標(biāo)本，分別使用全自動生化分析儀和放射免疫法測定血脂、血漿及主動脈組織中血管緊張素II(ANG II)的濃度；

3、分離胸主動脈，取主動脈弓近段3 mm，進(jìn)行HE染色顯微鏡下和電鏡下觀察主動脈組織形態(tài)學(xué)變化。半定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction，RT-PCR)、免疫組織化學(xué)及Western Blot方法測定血管緊張素II受體(ATR)mRNA與蛋白的表達(dá)。
　　 (2)細(xì)胞研究原代培養(yǎng)大鼠血管平滑肌細(xì)胞(Vascular Smooth Muscle Cells

4、，VSMCs))，傳代后取4～8代細(xì)胞進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)。用終濃度為1μmol.l-1血管緊張素II誘導(dǎo)6 h，隨機(jī)分成：空白對照組(Con組，含10％FBS的DMEM培養(yǎng)基)，ANGII組(1μmol.l-1 ANG II)，不同濃度羅格列酮(20、30、40、50μmol.l-1)干預(yù)組，30μmol.l-1羅格列酮干預(yù)不同時(shí)間組(6、12、18、24 h)。分別采用四甲基偶氮唑鹽微量酶反應(yīng)比色法(MTT)和流式細(xì)胞分析技術(shù)(FCM)觀

5、察血管平滑肌細(xì)胞的增殖程度和增殖周期的變化；RT-PCR和Western blot測定不同干預(yù)條件下VSMCs ATRmRNA及蛋白的表達(dá)水平。
　　 結(jié)果：(1)羅格列酮和厄貝沙坦均能明顯抑制高膽固醇飼養(yǎng)引起的體重增加，而且厄貝沙坦的作用強(qiáng)于羅格列酮(P<0.05)；(2)高膽固醇飼養(yǎng)6個月引起明顯高脂血癥，包括甘油三酯(TG)、膽同醇(TC)和低密度脂蛋白(LDL-C)升高(P<0.01)，并呈腹型肥胖體態(tài)，與Cho組相比，

6、羅格列酮顯著抑制高膽固醇飼養(yǎng)引起TG、TC、LDL-C的升高(P<0.01)，厄貝沙坦對TG、TC的作用與羅格列酮相似，然而對LDL-C沒有影響；(3)血漿ANG II的濃度各亞組之間無顯著性差異。Cho組主動脈組織中ANG II的水平明顯高于對照組(P<0.01)，羅格列酮和厄貝沙坦一致地抑制主動脈組織局部ANG II的升高(P<0.01)；(4)Cho組主動脈弓近段可見早期動脈粥樣硬化的脂質(zhì)條紋，HE染色顯示血管內(nèi)膜下大量脂質(zhì)沉積、

7、平滑肌細(xì)胞增生、排列紊亂并向內(nèi)膜下移行。電鏡下顯示內(nèi)皮細(xì)胞變性壞死，向管腔剝離、脫落，細(xì)胞間連接變直變寬，內(nèi)皮下間隙擴(kuò)大。但是在所有的切片中尚未觀察到典型的動脈粥樣硬化斑塊，上述特征性的早期動脈粥樣硬化的病理改變在對照組及兩藥物干預(yù)組均未見到；(5)Cho組主動脈AT1R和AT2R mRNA及蛋白表達(dá)明顯高于對照組(P<0.01)，羅格列酮和厄貝沙坦同等程度地抑制AT1R mRNA及蛋白表達(dá)(P<0.01)。然而對AT2R mRNA及蛋

8、白表達(dá)的作用相反，前者上調(diào)AT2R的表達(dá)，后者下調(diào)(P<0.05，0.01)；(6)細(xì)胞實(shí)驗(yàn)顯示ANG II組吸光度(A值)明顯高于對照組(P<0.01)，不同濃度的羅格列酮干預(yù)12 h及30μmol.l-1羅格列酮干預(yù)不同時(shí)間后，A值均明顯降低(P<0.05，0.01)；FCM檢測顯示ANG II組PI，SPF，S期和G2/M期細(xì)胞百分比明顯高于對照組(P<0.01)，隨著羅格列酮干預(yù)濃度的增加或干預(yù)時(shí)間的延長，PI、SPF及增殖期細(xì)

9、胞的百分比均明顯下降，接近對照組(P<0.05，0.01)；(7)基礎(chǔ)狀態(tài)下，體外培養(yǎng)的大鼠VSMCs AT1R和AT2R均有少量的基礎(chǔ)表達(dá)。ANG II顯著上調(diào)AT1R mRNA及蛋白的表達(dá)(P<0.05，0.01)，下調(diào)AT2RmRNA及蛋白的表達(dá)(P<0.05)。與ANG II組相比，以不同濃度(20、30、50)μmol.l-1羅格列酮干預(yù)12 h及同一濃度(30μmol.l-1)干預(yù)不同時(shí)間(6、12、24 h)均顯著抑制AT

10、1R mRNA及蛋白的表達(dá)(P<0.05，0.01)，升高AT2R mRNA及蛋白的表達(dá)(P<0.05，0.01)，在50μmol.l-1濃度組和以30μmol.l-1干預(yù)24 h作用最強(qiáng)。
　　 結(jié)論：
　　 (1)羅格列酮通過改善脂質(zhì)代謝、降低主動脈組織局部血管緊張素II的濃度、在轉(zhuǎn)錄和翻譯水平下調(diào)血管緊張素II1型受體、上調(diào)2型受體的表達(dá)，拮抗高膽固醇飲食誘發(fā)大鼠早期動脈粥樣硬化的形成：
　　 (2)羅格列

11、酮以濃度和時(shí)間依賴形式在基因和蛋白水平抑制血管緊張素II誘導(dǎo)血管平滑肌細(xì)胞AT1R表達(dá)的增加、進(jìn)一步升高AT2R表達(dá)，從而抑制血管平滑肌細(xì)胞增殖，發(fā)揮血管保護(hù)作用。
　　 目的：在體研究過氧化物酶增殖體活化受體-γ(Peroxisome Proliferators Activated ReceptorGamma，PPARγ)活化對心肌腎素-血管緊張素(Renin-Angiotensin System，RAS)和脂聯(lián)素(Adipo

12、nectin)系統(tǒng)的影響及可能的心臟保護(hù)作用。
　　 方法：38只體重190～210 g雄性Wistar-Kyoto鼠隨機(jī)分為下列組：普通飼料組(Con組n=8)；高膽同醇組(Cho組，n=10)，喂高膽固醇飼料；羅格列酮干預(yù)組(Ros組，n=10)，高膽固醇飼料加羅格列酮(4 mg·Kg-1.day-1)；厄貝沙坦干預(yù)組(Irb組，n=10)，高膽固醇例料加厄貝沙坦(50 mg·Kg-1.day-1)。高膽固醇適應(yīng)性飼養(yǎng)1個月

13、后開始藥物干預(yù)，持續(xù)5個月。處死動物前禁食12 h，稱體重、左心室穿刺采集血標(biāo)本、分離左心室肌組織，分別使用全自動生化分析儀、放射免疫法和ELISA測定血脂、血漿和心肌組織中血管緊張素II和脂聯(lián)素水平。以左心室重量與體重的比值(Left Ventricular Weighit/Body Weight，LVW/BW mg/g)，平均心肌細(xì)胞直徑、HE和Masson染色顯微鏡下觀察評估心肌形態(tài)的變化。半定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(Reverse

14、 Transcription-Polymerase Chain Reaction.RT-PCR)、免疫組織化學(xué)及Western Blot方法測定血管緊張素II受體(ATR)和脂聯(lián)素受體(AdipoR)mRNA與蛋白的表達(dá)。
　　 結(jié)果：(1)與對照組相比，高膽固醇組大鼠體重明顯增加，呈腹型肥胖體態(tài)，羅格列酮、厄貝沙坦均顯著抑制高膽固醇飼養(yǎng)誘發(fā)的體重增加(P<0.05，0.01)。以LVW/BW比值和平均心肌細(xì)胞直徑增加，心肌細(xì)胞

15、中大量脂質(zhì)沉積為病理特征的左室肥厚，尚未觀察到心肌間質(zhì)纖維化，然而這些病理改變在對照組和兩藥物干預(yù)組幾乎沒有發(fā)現(xiàn)(P<0.05，0.01)；(2)高膽固醇飼養(yǎng)誘發(fā)明顯的高脂血癥，包括高膽固醇(TC)、高甘油三酯(TG)和高低密度脂蛋白膽固醇血癥(LDL-C)(P<0.01)。羅格列酮和厄貝沙坦干預(yù)后明顯抑制TC和TG的升高(P<0.01)，羅格列酮抑制高膽固醇飼養(yǎng)引起LDL-C的升高(P<0.01)，而厄貝沙坦對其沒有作用，兩藥物組間相

16、比有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)；(3)血漿ANG II濃度在各組之間比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。羅格列酮和厄貝沙坦顯著抑制高膽固醇飼養(yǎng)誘發(fā)心肌ANG II水平的升高(P<0.01)。與對照組相比，高膽同醇組心肌AT1R和AT2R基因和蛋白表達(dá)明顯升高(P<0.01)，羅格列酮和厄貝沙坦干預(yù)后明顯抑制了 AT1R基因和蛋白表達(dá)的升高(P<0.01)，并且進(jìn)一步上調(diào)AT2R的表達(dá)(P<0.05)；(4)高膽固醇飼養(yǎng)大鼠心肌脂聯(lián)素水平、AdipoR1

17、mRNA和蛋白表達(dá)明顯低于普通飼料組(P<0.01)，羅格列酮和厄貝沙坦均能拮抗高膽固醇血癥誘發(fā)脂聯(lián)素水平和AdipoR1表達(dá)的下降(P<0.01)，而AdipoR2 mRNA和蛋白的表達(dá)水平在各實(shí)驗(yàn)亞組之間無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　 結(jié)論：
　　 (1)羅格列酮通過改善脂質(zhì)代謝、抑制體重增加、降低心肌組織局部ANG II水平、在基因和蛋白水平抑制AT1R、升高AT2R的表達(dá)，拮抗高膽固醇飲食誘發(fā)的心肌肥厚；
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