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文檔簡(jiǎn)介
1、目的:
尿道損傷及尿道手術(shù)后尿道狹窄發(fā)生率較高。至今,臨床上尚無切實(shí)有效的方法治療尿道狹窄,始終不能擺脫狹窄-擴(kuò)張/手術(shù)-再狹窄的診治怪圈,給患者帶來極大的痛苦。尿道瘢痕組織是尿道創(chuàng)傷修復(fù)過程的產(chǎn)物,沒有瘢痕就不會(huì)有創(chuàng)面的愈合。但是瘢痕一旦過度生長(zhǎng),就會(huì)產(chǎn)生尿道狹窄。目前研究發(fā)現(xiàn):狹窄的尿道組織存在典型的瘢痕過度增生改變。但對(duì)引起尿道瘢痕過度增生的影響因素不是很明確,因而缺乏有效的措施阻止尿道狹窄的發(fā)生。在對(duì)皮膚創(chuàng)面瘢痕形成的
2、研究中發(fā)現(xiàn):創(chuàng)面愈合過程中成纖維細(xì)胞表現(xiàn)出強(qiáng)烈的增殖能力以及膠原大量分泌、沉積,所以認(rèn)為成纖維細(xì)胞過度表達(dá)及膠原的異常分泌是瘢痕產(chǎn)生的根本原因。成纖維細(xì)胞是最主要的修復(fù)細(xì)胞。青蒿素是我國有自主知識(shí)產(chǎn)權(quán)的藥物,我國正對(duì)該藥進(jìn)行大力開發(fā)和研究。近年發(fā)現(xiàn)青蒿素有較好的抑制瘢痕成纖維細(xì)胞增殖作用。本課題旨在通過對(duì)二氫青蒿素干預(yù)后抑制人尿道瘢痕成纖維細(xì)胞增殖的研究,以揭示二氫青蒿素抑制人尿道瘢痕成纖維細(xì)胞增殖的機(jī)制,為人尿道瘢痕防治開辟新路,為臨
3、床預(yù)防和治療尿道瘢痕狹窄提供理論依據(jù)。
方法:
1.采用組織塊貼壁法進(jìn)行尿道瘢痕成纖維細(xì)胞的原代培養(yǎng),使用含10%胎牛血清的RPMI-1640培養(yǎng)基,37℃,5%CO2,飽和濕度下培養(yǎng);描述其生長(zhǎng)曲線、分裂指數(shù)、形態(tài)及波形蛋白表達(dá)。
2.采用MTT法測(cè)定二氫青蒿素對(duì)尿道瘢痕成纖維細(xì)胞的IC50,采用TUNEL法檢測(cè)二氫青蒿素作用后尿道瘢痕成纖維細(xì)胞凋亡情況,同時(shí)采用比色法測(cè)定caspase-3、8和9在二氫
4、青蒿素作用后的活化情況,以判斷二氫青蒿素作用后是否導(dǎo)致尿道瘢痕成纖維細(xì)胞中的caspase活化,并了解是通過哪條通路促進(jìn)凋亡。
結(jié)果:
1.尿道瘢痕成纖維細(xì)胞培養(yǎng)成功率75%(6/8);50~66天可傳第一代,以后每5~10天可傳一代,傳代后生長(zhǎng)良好;細(xì)胞為長(zhǎng)梭形,波形蛋白表達(dá)陽性。
2.二氫青蒿素對(duì)尿道瘢痕成纖維細(xì)胞的IC50為145μmol/L。通過TUNEL法檢測(cè)到145μmol/L二氫青蒿素作用于尿
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