白藜蘆醇對(duì)培養(yǎng)海馬神經(jīng)元的突觸功能活動(dòng)的調(diào)控作用.pdf

1、目的：
　　本研究在體外培養(yǎng)已形成突觸聯(lián)系的海馬神經(jīng)元上,應(yīng)用全細(xì)胞電壓鉗技術(shù)記錄突觸后電流:微興奮性突觸后電流(mEPSC)、誘發(fā)興奮性突觸后電流(eEPSC)、微抑制性突觸后電流(mIPSC)和誘發(fā)抑制性突觸后電流(eIPSC),通過(guò)孵育或者灌流100μmol/L白藜蘆醇(resveratrol,Res)來(lái)探究其對(duì)神經(jīng)元之間突觸傳導(dǎo)的影響,進(jìn)而對(duì)Res在神經(jīng)元損傷過(guò)程中所起的保護(hù)和修復(fù)作用機(jī)理提供可能解釋。
　　方法：<

2、br>　　1.體外培養(yǎng)海馬神經(jīng)元
　　在4℃Hanks平衡鹽溶液中迅速將4只C57BL/6乳鼠海馬組織取出,并用此溶液洗一遍后,用1ml0.25％胰蛋白酶-EDTA在37℃消化12min,然后用含有5%胎牛血清的Hanks平衡鹽溶液終止消化。將消化后的海馬組織移入貼壁培養(yǎng)基吹打15-20次后將細(xì)胞懸液滴在玻璃片上,37℃貼壁30min后加入1ml貼壁培養(yǎng)基。在培養(yǎng)第1天、第4天和第9天分別更換生長(zhǎng)培養(yǎng)基,培養(yǎng)14d后進(jìn)行全細(xì)胞電壓

3、鉗記錄實(shí)驗(yàn)。
　　2.全細(xì)胞記錄
　　神經(jīng)元體外培養(yǎng)14天后,取出載有形成突觸聯(lián)系的海馬神經(jīng)元的玻璃片置于細(xì)胞外液中,分別灌流或者孵育酒精(對(duì)照組)或100μmol/LRes(實(shí)驗(yàn)組),用膜片鉗記錄系統(tǒng)在電壓鉗模式下進(jìn)行全細(xì)胞記錄。
　　3.數(shù)據(jù)處理和統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
　　原始數(shù)據(jù)首先用clampfit和Igor6.0進(jìn)行處理,然后用GraphPadprism5統(tǒng)計(jì)軟件分析。實(shí)驗(yàn)結(jié)果以`x±SEM表示,組間平均值用t檢

4、驗(yàn)進(jìn)行比較,P<0.05具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果：
　　1.Res對(duì)抑制性突觸傳導(dǎo)的影響進(jìn)行mIPSC或eIPSC記錄時(shí),在細(xì)胞外液中加入10μmol/LCNQX(AMPA受體阻斷劑)和1μmol/LTTX(Na+通道阻斷劑)。在此條件下,在灌流100μmol/LRes過(guò)程中,記錄的海馬神經(jīng)元mIPSC在每個(gè)時(shí)間段的幅值和頻率均無(wú)明顯變化(n=10,P>0.05);用100μmol/LRes孵育海馬神經(jīng)元前后,記錄的mIP

5、SC的幅值和頻率也沒(méi)有明顯變化(n=24,P>0.05);灌流100μmol/LRes對(duì)eIPSC的幅值和短時(shí)程可塑性也沒(méi)有明顯影響(n=10,P>0.05)。2.Res對(duì)興奮性突觸傳導(dǎo)的影響進(jìn)行mEPSC或eEPSC記錄時(shí),在細(xì)胞外液中加入PTX(GABA受體阻斷劑)和1μmol/LTTX。在此條件下,用100μmol/LRes孵育海馬神經(jīng)元前后,記錄的mEPSC的幅值和頻率均無(wú)明顯變化(n=24,P>0.05);記錄的eEPSC的幅