白藜蘆醇誘導(dǎo)大鼠骨髓基質(zhì)細胞的神經(jīng)元樣細胞分化及其機制研究.pdf

1、目的:研究白藜蘆醇體外誘導(dǎo)大鼠骨髓基質(zhì)細胞(Marrowstroma cells，MSG)的神經(jīng)元樣細胞分化及其可能的機制。
　　方法:采用全骨髓貼壁法分離培養(yǎng)MSCs;用含白藜蘆醇的無血清DMEM/F12誘導(dǎo)MSG分化。倒置顯微鏡下觀察細胞形態(tài)，掃描電鏡檢測細胞表面的初級纖毛，免疫熒光法、免疫印跡法檢測nestin、NSE、MAP-2、GFAP、Ac-Tu、Ptc1、Smo和Gli1的表達。
　　結(jié)果:1.白藜蘆醇誘導(dǎo)后細

2、胞胞體收縮，伸出長突起，類似神經(jīng)元。免疫熒光顯示MSCs及對照組細胞表達神經(jīng)元NSE蛋白，誘導(dǎo)后細胞NSE、MAP-2蛋白陽性，但誘導(dǎo)前后細胞始終未表達膠質(zhì)細胞GFAP蛋白。免疫印跡顯示MSCs及對照組細胞輕度表達nestin、NSE蛋白，隨著誘導(dǎo)時間延長，nestin的表達漸減弱，NSE和MAP-2的表達漸增強，但誘導(dǎo)前后細胞始終未表達膠質(zhì)細胞GFAP蛋白。
　　2.正常培養(yǎng)的MSCs不表達初級纖毛。經(jīng)過預(yù)誘導(dǎo)或饑餓處理24h后

3、，MSCs表達初級纖毛、蛋白Ptc1、Smo和Gli1，其中Smo和Gli1位于胞漿，Ptc1位于初級纖毛。白藜蘆醇誘導(dǎo)后，Smo從細胞漿進入初級纖毛，Gli1從細胞漿進入細胞核，同時，Smo、Gli1蛋白的表達增加。在正常培養(yǎng)時，白藜蘆醇不能促使Smo移位以及MSCs向神經(jīng)元樣細胞分化。當(dāng)MSCs表達初級纖毛時，白藜蘆醇以及Smo激動劑SAG可使Smo從胞漿進入初級纖毛，同時伴隨MSCs向神經(jīng)元樣細胞的分化和蛋白Smo、Gli1的表達