抗HIV-1化合物組合為候選殺微生物劑體外研究.pdf

1、通過性途徑獲得的人類免疫缺陷病毒(Human Immunodeficiency Virus，HIV)感染逐年增加，2012年中國84.9％的HIV新增感染病例是通過性接觸傳播的[1]，UNAIDS宣布減少50％HIV性傳播是2015年艾滋病防控的十大目標(biāo)之一[2]。在積極研發(fā)有效的HIV疫苗的同時(shí)，其他生物預(yù)防策略如殺微生物劑阻斷性途徑HIV感染也成為當(dāng)前生物預(yù)防技術(shù)領(lǐng)域的研究熱點(diǎn)之一。殺微生物劑是具有抗病毒活性的物質(zhì)，包括化學(xué)合成小分

2、子、生物合成大分子、天然植物礦物及其提取物等，通過在陰道或直腸內(nèi)給藥來控制性傳播感染性疾病包括HIV的感染。2010年發(fā)表的CAPRISA004臨床試驗(yàn)結(jié)果表明，含1％替諾福韋(Tenofovir, TFV)—一種逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑——的陰道凝膠能夠減少39％的女性感染HIV-1[3]。該結(jié)果極大地激勵(lì)了新型更有效的殺微生物劑的研發(fā)進(jìn)程。不同作用機(jī)制的多種抗病毒藥物聯(lián)合使用不僅能夠產(chǎn)生協(xié)同抗HIV-1效應(yīng)，還可降低單個(gè)藥物的使用劑量，減少毒

3、性，降低單一藥物使用易發(fā)的耐藥等副作用。因此，本研究主要在體外細(xì)胞系模型開展不同作用機(jī)制的抗病毒藥物聯(lián)合阻斷HIV進(jìn)入宿主細(xì)胞、并抑制病毒在宿主細(xì)胞內(nèi)的復(fù)制的效果的研究，為新型殺微生物劑的研發(fā)提供有效候選。
　　本研究采用的體外評(píng)價(jià)體系是基于TZM-bl細(xì)胞模型。TZM-bl細(xì)胞屬HeLa細(xì)胞系，表面共表達(dá)HIV-1受體分子CD4及輔助受體分子(Co-receptor) CC趨化因子受體5(CC chemokine recepto

4、r5，CCR5)、CXC趨化因子受體4(CXCchemokine receptor4，CXCR4)，并攜帶熒光素酶表達(dá)基因，HIV-1感染細(xì)胞時(shí)HIV的Tat蛋白可激活熒光素酶表達(dá)，TZM-bl細(xì)胞系已是一種成熟的體外篩選抗HIV藥物平臺(tái)。
　　本研究首先評(píng)價(jià)了中藥提取物ScirpusinA和B抗病毒效果，發(fā)現(xiàn)兩種候選藥物可有效抑制HIV假病毒的單一周期感染，還能抑制實(shí)驗(yàn)室適應(yīng)株HIV-1ⅢB的感染(EC50(Scirpusin

5、B)=1.33μM; EC50(Scirpusin A)=4.77μM)，提示Scirpusin B的抗病毒作用優(yōu)于Scirpusin A，具體機(jī)制尚待深入研究。
　　同時(shí)，本研究還評(píng)價(jià)了2種不同作用機(jī)制的化合物（HIV核衣殼蛋白抑制劑SAMT10和膜融合抑制劑西夫韋肽）對(duì)HIV-1病毒的聯(lián)合抑制效果。發(fā)現(xiàn)這兩種不同作用機(jī)制的藥物聯(lián)合使用，在抑制HIV-1假病毒感染時(shí)，相對(duì)于單獨(dú)使用SAMT10或SFT， EC50分別提升了5-6

6、倍(SAMT0:6.23μMvs.1.06μM; SFT:3.52nM vs.0.71nM)。在抑制HIV-1ⅢB病毒感染時(shí)，相對(duì)于單獨(dú)使用SAMT10或SFT，EC50分別提升了3.44倍(SAMT10)和2.34倍(SFT)。而且，當(dāng)SMAT10與SFT進(jìn)行定摩爾率組合應(yīng)用時(shí)，相比單獨(dú)用藥，聯(lián)合用藥EC50降低，CI值＜1，說明SAMT10與SFT聯(lián)合使用能夠產(chǎn)生良好的協(xié)同作用。
　　本研究結(jié)果為新型殺微生物劑研發(fā)提供了良好的