熱休克蛋白gp96作為新型佐劑增強(qiáng)BCG疫苗T細(xì)胞應(yīng)答.pdf

1、結(jié)核病是繼艾滋病之后，全世界由單一傳染性病原體引發(fā)的最大疾病?？ń槊?簡稱BCG)是用于預(yù)防結(jié)核病的疫苗，雖然卡介苗在很多地方仍然使用，但是不可忽略的是其疫苗效率逐年降低。不同地區(qū)，不同年齡的人群接種后，卡介苗的效果都會有所不同。目前BCG的免疫效率在0～80％之間，免疫功效有待進(jìn)一步提高。
　　本實(shí)驗(yàn)室前期研究發(fā)現(xiàn)，熱休克蛋白gp96能通過抗原呈遞激活特異性T細(xì)胞并且具有天然佐劑功能。通過查閱大量文獻(xiàn)，我們發(fā)現(xiàn)有關(guān)于乳鐵蛋白作為

2、佐劑對BCG疫苗保護(hù)效率的研究。但由于乳鐵蛋白表達(dá)量低，純化操作復(fù)雜，因此沒有大規(guī)模的生產(chǎn)。受此啟發(fā)，本研究以gp96作為BCG的新型佐劑聯(lián)合免疫C57BL/6小鼠，考察gp96是否活化BCG特異性T細(xì)胞，為增強(qiáng)BCG的免疫效率提供新的思路。本文首先利用實(shí)驗(yàn)室已有的印96昆蟲表達(dá)載體表達(dá)gp96蛋白，然后對表達(dá)的目的蛋白進(jìn)行純化并通過SDS-PAGE和Western Blot鑒定，結(jié)果顯示純度達(dá)到95％。利用酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)實(shí)驗(yàn)、流式細(xì)胞內(nèi)

3、因子染色技術(shù)檢測gp96是否增強(qiáng)BCG特異性細(xì)胞應(yīng)答，結(jié)果顯示gp96可以使BCG特異性的細(xì)胞免疫水平提高約50％。再通過酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)檢測血清中的炎癥因子IFN-γ、IL-2、TNF-α、IL12、IL-10的分泌，分析得出gp96能有效提高血清中促炎癥因子的分泌，降低抗炎癥因子的分泌。
　　進(jìn)一步研究gp96作為佐劑提高小鼠對BCG感染的免疫保護(hù)作用。分別在第一、二、四周免疫的小鼠，第五周BCG肺內(nèi)給藥48h后處死，取肺部組

4、織研磨涂板，結(jié)果顯示BCG聯(lián)合gp96免疫比BCG單獨(dú)免疫組小鼠肺部活菌數(shù)降低36％。H&E染色也可看出BCG+gp96免疫組肺部形態(tài)更完好。說明熱休克蛋白gp96可以有效降低BCG引起的肺部感染。最后通過對1，2和4周免疫的小鼠，第5周尾靜脈注射BCG攻毒。在尾靜脈攻毒后18天的觀察期內(nèi)，BCG組免疫的小鼠比gp96+BCG組免疫的小鼠體重降幅明顯。
　　綜上所述，gp96作為新型佐劑能有效增強(qiáng)BCG疫苗的T細(xì)胞應(yīng)答，這為提高B