miR-124通過調控flotillin-2對精子頂體形成的作用和機制研究.pdf

1、目的：研究miR-124通過調控flotiliin-2對精子發(fā)生過程中頂體形成的作用，并進一步探討miR-124在頂體形成過程中的表達機制。
　　方法：首先，運用生物信息學軟件驗證miR-124與flotillin-2的mRNA3'-UTR存在互補結合位點;然后，采用雙熒光素酶報告基因技術探討miR-124對flotillin-2的靶向調控關系;接著，采用睪丸網(wǎng)微注射技術，將miR-124活性片段直接注射入三周齡雄性小鼠的生精小管

2、，48小時后運用實時熒光定量PCR和蛋白免疫技術驗證miR-124對flotillin-2的影響;最后，在睪丸網(wǎng)微注射三周后，運用光學顯微鏡和透射電鏡觀察小鼠精子的形態(tài)。
　　結果：生物信息學證實miR-124與flotillin-2的mRNA3'-UTR存在直接互補結合位點。當miR-124表達上調，flotillin-2的表達水平下降，miR-124對flotillin-2的表達起著負向調節(jié)的作用。與對照組相比，實驗組的精子畸

3、形率明顯增加(28.5％ vs.19.9％，P=4.68*10-5)，特別是頭部畸形(20.7％vs.13.7％，P=0.025)，這些差異存在統(tǒng)計學意義，并且大部分頭部畸形精子的頂體都有異常。透射電鏡顯示頭部畸形小鼠精子的超微結構為：頂體缺失；頂體形態(tài)異常----頂體中存在分散的、沒有融合的小顆粒或小囊泡;存在較大的頂體囊泡;存在殘留的或退化的高爾基復合體。
　　結論：miR-124可以通過調控flotillin-2的表達影響精