重組大腸桿菌發(fā)酵產(chǎn)β-環(huán)糊精葡基轉(zhuǎn)移酶條件的優(yōu)化及其該酶降血糖活性的研究.pdf

1、β-環(huán)糊精葡基轉(zhuǎn)移酶（Cyclodextrin Glucanotransferase，簡(jiǎn)稱(chēng)CGTase，E．C．2．4．1．19）屬于α-淀粉酶家族，能夠催化淀粉及相關(guān)基質(zhì)進(jìn)行分子間轉(zhuǎn)糖基反應(yīng)合成環(huán)糊精（Cyclodextrin，CD）。 本文對(duì)一株基因工程菌E．coli BL21（DE3）產(chǎn)β-環(huán)糊精葡基轉(zhuǎn)移酶的培養(yǎng)基和發(fā)酵條件以及該酶的分離純化進(jìn)行了系統(tǒng)的研究。并且，對(duì)該酶在降低小鼠血糖方面的作用進(jìn)行了初步探討。 1

2、．利用單因素和正交試驗(yàn)優(yōu)化了基因工程菌E．coli BL21（DE3）菌株的產(chǎn)酶的最佳培養(yǎng)基配方，并確定了產(chǎn)酶的最佳培養(yǎng)條件：培養(yǎng)基的組成為玉米粉1．5％，玉米漿6％，蛋白胨1．0％，接種量3％，培養(yǎng)溫度37℃，培養(yǎng)基初始pH8．0；搖瓶發(fā)酵培養(yǎng)：500 ml三角瓶裝液量為50 ml，210 r/min振蕩培養(yǎng)，其發(fā)酵液酶活可達(dá)5010 U/mL；在發(fā)酵罐中的最佳發(fā)酵條件：攪拌速度為200 r/min，通氣量為1 L/min。

3、2．β-環(huán)糊精葡基轉(zhuǎn)移酶的粗酶液經(jīng)過(guò)淀粉-硫酸銨沉淀初步純化，然后經(jīng)Sephacryl S-100凝膠層析后，比活力分別提高了18倍和36倍，由初始122．5 U/mg蛋白質(zhì)增加到4429 U/mg蛋白質(zhì)，回收率分別為64．1％、35．2％，經(jīng)SDS-PAGE電泳顯示為單一的蛋白帶。 3．以β-環(huán)糊精葡基轉(zhuǎn)移酶為受試物，通過(guò)灌胃和腹腔給藥兩種方式，研究β-環(huán)糊精葡基轉(zhuǎn)移酶對(duì)四氧嘧啶所致糖尿病小鼠血糖的影響，確定其有效作用方式和對(duì)