茶葉中主要特征成分在Caco-2細(xì)胞模型中吸收情況的研究.pdf

1、茶葉是一種健康飲料，其內(nèi)含物中的多種特征成分對(duì)人體都具有重要的保健功能，如茶氨酸、多酚類和咖啡堿等。其中，茶氨酸（又稱N-乙基-γ-L-谷氨酰胺，簡(jiǎn)稱Theanine）是茶葉中特有的氨基酸，也是茶樹(shù)中含量最高的游離氨基酸，占茶葉干重的1％～2％，占游離氨基酸總量的50％以上。茶氨酸不僅影響著茶葉的滋味，而且還具有重要的生物活性，如降血壓、抗癌、增強(qiáng)抗腫瘤藥物的療效、保護(hù)神經(jīng)、鎮(zhèn)靜安神、提高學(xué)習(xí)和記憶能力和抗疲勞的功效?？Х葔A亦稱咖啡因（

2、1，3，7-三甲基-2，6—二氧嘌呤），屬黃嘌呤生物堿，咖啡堿是茶葉中含量最多的生物堿，含量一般在2％～4％左右?？Х葔A對(duì)人體有強(qiáng)心、利尿、解毒等生理作用，還可用于治療神經(jīng)衰弱和精神抑制狀態(tài)癥，還是配制解熱鎮(zhèn)痛藥品的重要原料。
　　 茶葉中的這些功能成分被人體的吸收利用度是發(fā)揮其保健功效的基礎(chǔ)?，F(xiàn)有的關(guān)于茶葉內(nèi)含成分吸收情況的研究主要以動(dòng)物實(shí)驗(yàn)居多，其缺點(diǎn)在于存在著實(shí)驗(yàn)動(dòng)物種屬差異。本文研究了茶氨酸、咖啡堿和其他氨基酸在Caco

3、-2細(xì)胞模型中的吸收轉(zhuǎn)運(yùn)情況。Caco-2細(xì)胞源自人結(jié)腸癌細(xì)胞，消除了種屬差異，體外培養(yǎng)時(shí)能自發(fā)地進(jìn)行類似腸道細(xì)胞的形態(tài)學(xué)和生化學(xué)上的分化，獲得許多小腸吸收細(xì)胞的特性，其細(xì)胞模型能很好地模擬腸道組織。
　　 本文構(gòu)建了Caco-2細(xì)胞單層模型，對(duì)不同濃度的茶氨酸和綠茶提取物進(jìn)行了Caco-2細(xì)胞攝取和轉(zhuǎn)運(yùn)實(shí)驗(yàn)，后用HPLC方法檢測(cè)轉(zhuǎn)運(yùn)和攝取樣品。
　　 攝取實(shí)驗(yàn)中分別給藥0.25，0.5，1，2mmol/L的茶氨酸15m

4、in，測(cè)定細(xì)胞內(nèi)茶氨酸濃度，結(jié)果表明茶氨酸主要以被動(dòng)擴(kuò)散的方式被細(xì)胞攝取。
　　 轉(zhuǎn)運(yùn)實(shí)驗(yàn)中分析了茶氨酸AP-BL方向和BL-AP方向的表觀通透系數(shù)(Papp)、溢出率(efflux ratio)和滲透率等。結(jié)果表明，當(dāng)給藥0.25mmol/L和1 mmol/L純品茶氨酸時(shí)雙向轉(zhuǎn)運(yùn)的Papp值均大于1×10-7 cm/s，說(shuō)明茶氨酸能在Caco-2細(xì)胞里吸收良好。但是當(dāng)茶氨酸濃度為4mmol/L時(shí)，efflux ratio顯著增

5、大，說(shuō)明Caco-2細(xì)胞對(duì)高濃度茶氨酸有較強(qiáng)的外排作用。但是給藥綠茶提取物時(shí)，其中的茶氨酸在BL-AP方向上出現(xiàn)了非常高的滲透率，表明綠茶提取物中的茶氨酸在Caco-2模型中出現(xiàn)強(qiáng)烈的外排作用，其吸收情況很差。結(jié)果提示綠茶成分在腸道轉(zhuǎn)運(yùn)時(shí)可能存在抑制作用。在分析前人研究結(jié)果的基礎(chǔ)上，我們判斷綠茶中影響茶氨酸吸收的物質(zhì)主要是谷氨酰胺，因?yàn)椴璋彼岷凸劝滨０吩谀c道內(nèi)的吸收共用在刷狀緣上與Na+偶聯(lián)的公共載體，且這種載體與茶氨酸的親和力要低于谷

6、氨酰胺。同時(shí)，據(jù)報(bào)道，其他氨基酸如精氨酸、色氨酸在跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)時(shí)也會(huì)共用此載體，因此這些氨基酸也可能抑制綠茶中茶氨酸的在Caco-2細(xì)胞模型中的吸收。
　　 轉(zhuǎn)運(yùn)實(shí)驗(yàn)中還分析了咖啡堿和其他氨基酸的轉(zhuǎn)運(yùn)情況，結(jié)果表明咖啡堿在Caco-2細(xì)胞模型中的吸收以被動(dòng)擴(kuò)散方式被細(xì)胞吸收，且較易被小腸腸道上皮細(xì)胞吸收。谷氨酸、絲氨酸、精氨酸、天冬氨酸、纈氨酸等氨基酸在接受端的積累量受濃度的影響不大，并且大部分氨基酸在提取物組的BL-AP方向上的轉(zhuǎn)