中國北方地區(qū)肝硬化及肝癌患者HBV基因型及亞型分析.pdf

1、背景與目的：乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)感染是引起慢性肝炎、肝硬化、肝癌的主要原因之一,全世界已有近3.5-4億人成為慢性HBV攜帶者。我國是HBV感染的中高流行區(qū),2006年的血清學(xué)調(diào)查結(jié)果表明我國一般人群HBsAg攜帶率為7.18％,有近3000萬慢性乙型肝炎患者。目前,依據(jù)全基因序列異質(zhì)性差異≥8%或S區(qū)基因序列差異≥4%,將HBV分為A—H8種基因型,其中A基因型又分為兩種亞型:Aa型(a代表Asi

2、a)和Ae型(e代表European);B基因型分為Ba型(a代表Asia)和Bj型(j代表Japan)兩種亞型;C基因型分為C1、C2兩個亞型。近年來的研究表明HBV基因型與傳播方式、疾病進展、預(yù)后以及臨床抗病毒療效等均有一定的相關(guān)性。為了解中國北方地區(qū)HBV基因型及亞型在終末期肝病病人中的分布情況,本研究采用基因型及亞型特異引物的巢式聚合酶鏈反應(yīng)檢測了101例肝硬化患者和178例原發(fā)性肝癌患者的HBV基因型及基因亞型分布,并結(jié)合臨床

3、資料分析HBV基因亞型與終末期肝病的相關(guān)性,以進一步明確不同HBV基因型致肝臟損害的差異。
　　材料與方法：1.選取2007-2008年北方地區(qū)HBV DNA陽性的肝硬化和原發(fā)性肝細胞癌住院患者共279例。其中包括155例新鮮肝臟組織標(biāo)本和124例血清標(biāo)本。2.核酸提取酚-氯仿抽提法分別提取血清和組織中的HBV-DNA。3.行巢式聚合酶鏈反應(yīng)對HBV-DNA進行分型。4.使用2%的瓊脂糖凝膠進行電泳。以2000DL分子量標(biāo)準的Ma

4、rker,作為分子量對照。5.凝膠成像,并通過產(chǎn)物片段的大小來判斷基因型(部分樣本進行前S/S區(qū)以及X區(qū)的基因測序,以驗證確定基因型)。6.數(shù)據(jù)分析采用SPSS13.0統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計,兩均數(shù)比較使用t檢驗,率的比較采用卡方檢驗,多個樣本的比較采用非參數(shù)檢驗。P<0.05時認為有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　結(jié)果：1.將PCR產(chǎn)物在2%瓊脂糖中進行電泳,根據(jù)PCR產(chǎn)物片段大小能清晰直觀地辨別出HBV的基因型及亞型。隨機選取部分樣本進行前S/S

5、區(qū)以及X區(qū)的基因測序,測序分型結(jié)果與PCR基因分型結(jié)果的符合率為100%,證實了此方法的特異性和準確性。2.PCR結(jié)果顯示,在101例肝硬化患者中,分型結(jié)果為Ba亞型的1例(0.99%),C2亞型94例(93.07%),Ba、C2混合型6例(5.94%)。在178例原發(fā)性肝癌患者中,分型結(jié)果為Ba亞型的6例(3.37%),C2亞型159例(89.33%),Ba、C2混合型13例(7.30%)。兩組患者中均未檢測到其他基因型。統(tǒng)計結(jié)果表明

6、,兩組的基因型均以C2型為主,Ba、C2亞型在肝硬化和肝癌患者中的分布無顯著性差異(P>0.05)。3.肝硬化與肝癌患者的男女構(gòu)成比有顯著性差異(P<0.05),男性在肝癌患者中所占比例大于在肝硬化患者中所占比例。各基因亞型感染患者中男性均多于女性,C2型肝硬化和肝癌患者的男女構(gòu)成比有顯著性差異(P<0.05)。肝硬化與肝癌患者的年齡分布無顯著差異(P>0.05)。經(jīng)Kruskal-Walls檢驗,各種基因亞型在肝硬化患者和肝癌患者中的

7、年齡分布無差別(P>0.05)。4.各種基因型HBeAg陽性率在肝硬化患者和肝癌患者中均無顯著性差異(P>0.05),但肝癌患者中HBeAg陽性率明顯低于肝硬化患者(P<0.05)。5.肝硬化和肝癌患者的TBIL水平有顯著性差異(P<0.05),但不同基因亞型肝硬化患者、肝癌患者中TBIL的水平無顯著性差異(P>0.05)。肝硬化和肝癌患者的ALT水平無顯著性差異(P>0.05),各種基因亞型在肝硬化患者或肝癌患者中的ALT水平無顯著性

8、差異(P>0.05)6.通過比較49對癌組織、癌旁組織HBV基因亞型的分布,發(fā)現(xiàn)有3對配對標(biāo)本的基因型不同,其中癌組織均為C2型,癌旁組織均為Ba、C2混合型。
　　結(jié)論：1.本研究結(jié)果顯示肝硬化和肝癌組病例均以C基因型感染為主,B型次之?；騺喰头治鼋Y(jié)果進一步表明,所有C型標(biāo)本均為C2亞型,所有B型標(biāo)本均為Ba亞型,而BC混合型標(biāo)本都為Ba亞型和C2亞型混合感染。2.肝硬化和肝癌患者中各基因型及亞型的分布無顯著性差異,而肝硬化及