靈芝(Ganoderma lucidum)多糖的制備及其免疫活性研究.pdf

1、論文采用響應(yīng)曲面設(shè)計(jì)原理優(yōu)化了超聲波提取靈芝（Ganoderma lucidum）多糖的工藝，根據(jù)帶電性質(zhì)和分子量采用DEAE C-52和Sephadex G-100分離得到單一組分的靈芝多糖，并研究了多糖組分GLP-2的結(jié)構(gòu)及其體外免疫活性，主要研究結(jié)果如下：
　　 1、采用響應(yīng)曲面法對(duì)影響靈芝多糖提取得率的3個(gè)主要影響因素即超聲功率、超聲時(shí)間和水料比進(jìn)行優(yōu)化。利用Design Expert軟件分析表明：靈芝多糖提取最佳工藝為

2、超聲功率680W，超聲時(shí)間17min，水料比28:1時(shí)，得率20.79±0.11mg/g，實(shí)測結(jié)果與響應(yīng)面擬和所得方程的預(yù)測值符合良好，超聲波提取靈芝多糖與傳統(tǒng)的熱水提取法相比，時(shí)間縮短了96％，得率提高了28％。
　　 2、通過DEAE C-52以及Sephadex G-100柱層析分級(jí)純化靈芝多糖，得到了兩個(gè)多糖組分GLP-1和GLP-2，分別占粗多糖的30.76％和48.29％，多糖總回收率為79.05％。結(jié)合紫外光譜分析

3、和高效凝膠過濾色譜法檢測了多糖組分純度，結(jié)果顯示GLP-2為均一組分，分子量為1.09×106Da。
　　 3、紅外光譜分析表明靈芝多糖GLP-2具有多糖類物質(zhì)的特征吸收峰，為吡喃糖且以β-構(gòu)型為主，并含有糖醛酸和硫酸酯。高效液相色譜法測定分析表明GLP-2主要是由葡萄糖、半乳糖組成，摩爾比分別達(dá)到68％和15％。通過核磁共振分析，得到靈芝多糖GLP-2主要是1，6連接的吡喃型葡萄糖為主鏈的非淀粉β葡聚糖。
　　 4、巨

4、噬細(xì)胞增殖及吞噬中性紅實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，得到靈芝多糖GLP-2能夠誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞，使巨噬細(xì)胞增殖率得到明顯的提高，當(dāng)GLP-2濃度為25μg/mL時(shí)，巨噬細(xì)胞增殖率達(dá)到161.53％，吞噬率達(dá)到了49.33％。
　　 5、通過人乳腺癌細(xì)胞培養(yǎng)證明靈芝多糖無直接殺死人乳腺癌細(xì)胞的作用；通過靈芝多糖誘導(dǎo)的巨噬細(xì)胞培養(yǎng)上清液對(duì)人乳腺癌增殖實(shí)驗(yàn)，得到靈芝多糖GLP-2誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞培養(yǎng)上清液對(duì)人乳腺癌細(xì)胞增殖有顯著的抑制作用，當(dāng)濃度為25μg/