美味牛肝菌多糖高產(chǎn)菌株的選育及其發(fā)酵工藝研究.pdf

1、美味牛肝菌屬外生菌根菌，其多糖具有明顯的抗腫瘤效果。為了選育出美味牛肝菌多糖高產(chǎn)菌株，本實(shí)驗(yàn)首次采用原生質(zhì)體紫外線一氯化鋰(UV-LiCl)復(fù)合誘變方法，并對(duì)誘變株(UL-7)發(fā)酵工藝進(jìn)行了研究。本實(shí)驗(yàn)主要研究結(jié)果如下： 1、首先摸索出美味牛肝菌出發(fā)菌株ACCC50559快速生長(zhǎng)的斜面培養(yǎng)基，并優(yōu)化出美味牛肝菌多糖的提取工藝和含量測(cè)定方法。在此基礎(chǔ)之上，進(jìn)行了出發(fā)菌株ACCC50559原生質(zhì)體UV-LiCl復(fù)合誘變選育多糖高產(chǎn)菌

2、株的研究，確定了原生質(zhì)體制備和復(fù)合誘變的最佳條件。原生質(zhì)體制備最佳條件為：培養(yǎng)52h的菌絲用0.02g/mL纖維素酶和0.02g/mL蝸牛酶(體積比1:1)混合酶液酶解，以0.6mol/L的甘露醇作為穩(wěn)滲劑，在25～29℃下酶解2h，原生質(zhì)體的數(shù)目可達(dá)3.50×106個(gè)/mL，其再生率為7.14％；原生質(zhì)體UV-LiCl復(fù)合誘變的最佳條件為：距15W紫外燈30cm處，照射原生質(zhì)體6min，然后涂布在0.04％LiCl平板上，避光培養(yǎng)10

3、d，致死率達(dá)到79.6％。對(duì)誘變菌株進(jìn)行平板培養(yǎng)和發(fā)酵試驗(yàn)，通過(guò)初篩和復(fù)篩最終選育出遺傳性狀穩(wěn)定的多糖高產(chǎn)菌株(UL-7)，其菌落密度和菌絲生長(zhǎng)長(zhǎng)勢(shì)較出發(fā)菌株要密和粗壯，生長(zhǎng)速度快，產(chǎn)量為3.972g.L-1，較出發(fā)菌株提高了41.9％； 2、優(yōu)化出誘變株UL-7液體發(fā)酵的最佳工藝條件。液體發(fā)酵產(chǎn)多糖的最適培養(yǎng)基配方(％)：蔗糖2，蛋白胨0.6，ZnSO4·7H2O0.10，CaCO30.1，MgSO4·7H2O0.2，KH2P

4、O40.3，馬鈴薯10；液體發(fā)酵產(chǎn)多糖的最適發(fā)酵條件：初始pH5.0～5.4，振蕩速度120r/mm，培養(yǎng)溫度25℃～28℃，裝液系數(shù)40％(v/v)，加玻璃珠10顆，發(fā)酵時(shí)間5d，多糖產(chǎn)量可達(dá)到4.361g/L； 3、在誘變株UL-7最佳液體發(fā)酵條件基礎(chǔ)上，首次探索出其高密度發(fā)酵高產(chǎn)多糖的工藝：接種生物量40g/L，初始pH5.4，培養(yǎng)溫度25℃，裝液系數(shù)40％(v/v)，振蕩速度160r/min，蛋白胨增加到1.8％，碳氮比