新型蛇床子素-pH敏感性納米粒的研制.pdf

1、目的:本課題旨在用pH-敏感性腸溶材料丙烯酸樹脂EudragitS100作為載體，將難溶性藥物蛇床子素(Ost)包裹以得到具有被動靶向性的蛇床子素納米粒（Ost-S100-NPs）及其凍干制劑（Fd-Ost-S100-NPs），并對該納米制劑的處方組成、制備工藝、體內(nèi)藥動學(xué)與組織分布、體內(nèi)外抗腫瘤活性進(jìn)行考察，以期得到一種安全有效的具有pH敏感性的蛇床子素新劑型。
　　 方法:(1)采用乳化-溶劑擴(kuò)散法制備Ost-S100-NP

2、s，并通過真空冷凍干燥法制備Fd-Ost-S100-NPs。以粒徑分布、包封率、載藥量為綜合指標(biāo)，采用L9(34)正交實(shí)驗(yàn)優(yōu)化制備工藝.(2)采用透射電鏡觀察Ost-S100-NPs的表面形態(tài)，動態(tài)激光散射法測定平均粒徑與粒度分布，差示掃描量熱法(DSC)和粉末X-ray衍射等技術(shù)對其表面特征、外觀形態(tài)進(jìn)行鑒別驗(yàn)證，并以動態(tài)透析法考察納米粒膠體的體外釋放特性。(3)以雙周期交叉隨機(jī)試驗(yàn)設(shè)計(jì)法，小鼠灌胃給予Ost、Ost-S100-NPs

3、，用3P97軟件計(jì)算藥動學(xué)參數(shù)。以藥動學(xué)參數(shù)(AUC，AUQ，Cmax，Tmax)和靶向參數(shù)(Te，RTe，TI)為評價(jià)指標(biāo)。(4)通過MTT法評價(jià)Ost及Ost-S100-NPs對人肝癌細(xì)胞SMMC-7721、肺腺癌細(xì)胞A549和宮頸癌細(xì)胞Hela-3的細(xì)胞毒作用;并運(yùn)用流式細(xì)胞法考察藥物對細(xì)胞誘導(dǎo)凋亡的作用機(jī)制。(5)通過建立H22、U14和S180細(xì)胞小鼠荷瘤模型，考察納米粒在小鼠體內(nèi)的抗腫瘤活性，包括腫瘤生長、體重抑制、抑瘤率、

4、對免疫器官的影響等，并用生物顯微鏡觀察腫瘤組織的病理學(xué)相關(guān)性質(zhì)。
　　 結(jié)果:(1)優(yōu)化工藝制備的納米粒的平均粒徑(55.46±2.19)nm，包封率(98.99±0.16)％，載藥量(23.85±0.29)％。(2)DSC、X衍射圖譜中，納米粒的特征吸收峰均與物理混合物不一樣;透射電鏡(TEM)照片顯示納米粒近似球形、邊緣清晰;納米粒體外釋放呈現(xiàn)pH依賴性，符合Weibull方程。(3)經(jīng)3P97軟件擬合，Ost和Ost-S1

5、00-NPs在小鼠體內(nèi)的藥代動力學(xué)過程均符合二室模型。與Ost相比，Ost-S100-Nps的AUC顯著增大(P＜0.05），CL(s)顯著降低(P＜0.05），相對生物利用度為163.9％。組織分布實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明Ost-S100-NPs改變了藥物在體內(nèi)的分布,相對提高了在腎臟和肝臟的分布，降低了脾中的分布，具有一定的肝肺靶向作用。(4)體外細(xì)胞作用結(jié)果顯示:對于Hela、A549和SMMC-7721三種腫瘤細(xì)胞，Ost和Ost-S100

6、-NPs均有一定程度的殺傷作用，其中Ost-S100-NPs的細(xì)胞毒作用要強(qiáng)于Ost。細(xì)胞凋亡實(shí)驗(yàn)和Hoechst染色實(shí)驗(yàn)證實(shí)了Ost-S100-NPs通過誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡來抑制細(xì)胞生長。(6)體內(nèi)抗腫瘤實(shí)驗(yàn)表明相比生理鹽水組，Ost、Ost-S100-NPs和Fd-Ost-S100-NPs均能有效地抑制H22、S180和U14腫瘤的生長。其中以O(shè)st-S100-NPs效果最優(yōu)，F(xiàn)d-Ost-S100-NPs次之，Ost效果最差。