激肽釋放酶、胰蛋白酶和糜蛋白酶聯(lián)產(chǎn)工藝的研究.pdf

1、胰酶是一種常用的醫(yī)藥、工業(yè)用原料藥，其成本低廉易于獲取，且所含活性物質(zhì)種類豐富，可以作為基礎(chǔ)原料從中提取多種生化藥品，如胰激肽釋放酶、彈性蛋白酶、核糖核酸酶、胰蛋白酶、糜蛋白酶，羧肽酶等等，其中激肽釋放酶、胰蛋白酶和糜蛋白酶三種藥用酶不但是目前臨床常用藥和現(xiàn)代生物學(xué)研究中的重要工具，而且價格昂貴，因此以胰酶為原料提取該三酶具有巨大的經(jīng)濟(jì)效益和應(yīng)用價值。但是由于胰酶為多種酶的混合物，每種酶的純度很低，許多酶又具有相似的分子結(jié)構(gòu)和理化性質(zhì)，

2、因此往往在提取一種酶的同時，其它酶被當(dāng)作雜質(zhì)處理掉了，這就導(dǎo)致了胰酶中三種以上酶聯(lián)產(chǎn)的工藝極為少見，而且已有工藝都有各自的不足。隨著酶分離純化技術(shù)的發(fā)展，人們迫切需要建立新的聯(lián)產(chǎn)工藝以適應(yīng)工業(yè)化的需求。 本研究考察了各種純化方法，將離子交換層析、親和層析和疏水層析三種分離純化法相結(jié)合，建立了激肽釋放酶、胰蛋白酶和糜蛋白酶三酶的聯(lián)產(chǎn)工藝：胰酶用pH4.5醋酸緩沖溶液提取后，粗提液直接上：DEAE-瓊脂糖快膠柱吸附(平衡緩沖液：0.

3、01mol/LNaoAc-HoAc緩沖液(pH4.5)，洗脫緩沖液：0.01mol/LNaoAc-HoAc緩沖液(pH4.5)含0.2～0.35mol/LNaCl)分兩步洗脫，收集激肽釋放酶的洗脫峰；DEAE-瓊脂糖快膠的未吸附液上親和層析柱分批吸附(平衡緩沖液：0.01mol/LTris-HC1緩沖液(pH7.5)，洗脫液：0.5mol/LNaCl溶液)，一次洗脫，收集胰蛋白酶洗脫峰；最后，親和層析未吸附液用30％～80％硫酸銨分級鹽

4、析處理，沉淀溶解后用上苯基-瓊脂糖快膠吸附(平衡緩沖液：0.01mol/LNaAc-HAc緩沖液(oH4.5)含1mol/L(NH<,4>)<,2>SO<,4>，洗脫緩沖液：0.01mol/LNaAc-HAc緩沖液(pH4.5)含0～0.6mol/L(NH<'4>)<,2>SO<,4>)，分兩步洗脫，收集糜蛋白酶的洗脫峰。 實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，該工藝制備的三酶比活和活性回收率較高：激肽釋放酶比活為550u/mg，收率73％；胰蛋白酶比