乳真蛋白和尿素與銨態(tài)氮檢測方法研究.pdf

1、目前，人們對乳制品的需求量越來越大，而作為乳制品基本來源的原料乳供應卻呈明顯短缺態(tài)勢。在此情況下，一些不法者為了自身利益而非法向原料乳中加入其他外源物質，獲取不正當利益。當前牛奶的摻假主要針對乳蛋白成分，使用的摻假物質主要包括縮二脲、三聚氰胺等化工原料、尿素、硫酸銨等農用化肥。引起這種摻假現(xiàn)象蔓延的原因主要在于現(xiàn)有蛋白檢測技術的缺陷以及摻假物質檢測方法的局限性。
　　 本研究針對目前乳品業(yè)發(fā)展中存在的上述狀況，分別對乳真蛋白(T

2、P)和尿素氮與銨態(tài)氮檢測方法及其檢測體系進行了研究。其中乳TP的檢測通過建立微量化Lowry反應體系進行，尿素氮和銨態(tài)氮的檢測通過建立酶解-Berthelot反應體系進行。研究中對每種反應體系建立過程中所涉及到的主要問題進行了實驗摸索，并依據方法學要求，對建立的每種反應體系從各主要方面進行了詳細評價。
　　 實驗結果表明，兩種反應體系分別可以準確、高效、靈敏的對乳TP和尿素氮與銨態(tài)氮總量進行測定，酶解-Berthelot體系還能

3、分別定量尿素氮與銨態(tài)氮濃度。各檢測體系的主要特點如下：
　　 微量化Lowry反應體系在自動分析應用中，其TP測定結果準確性高，與凱氏定氮法(不添加無機含氮物質、有機非蛋白質含氮物質時)間無顯著性差異；反應體系中樣品液蛋白濃度為10～100μg/mL線性良好，最低檢測濃度為5μg；可以將乳樣做500倍稀釋后直接測定，乳蛋白含量在0.5～5.0g/100g時可準確定量。方法在不同樣品、不同測定時間內的重復性良好；乳中可能存在或人為

4、添加的疊氮化鈉、碳酸氫鈉、硫酸鈉、尿素、三聚氰胺、硫酸銨、鹽酸羥胺、硫脲、亞硝酸鹽、蔗糖和氯化鈉等不會對測定結果產生干擾，重鉻酸鉀只有在濃度超過10mg/mL時，才對反應產生影響，其能使反應結果升高。
　　 酶解-Berthelot法測定乳中尿素氮與銨態(tài)氮，在0.5～400mg N/100g范圍內可準確定量(即尿素1.073mg/100g～0.858g/100g或硫酸銨2.36mg/100g～1.888g/100g，相當于3.1

5、25 mg/100g～2.5g/100g蛋白質的含氮量)，添加回收率高(＞96％)、結果準確，能夠準確定量尿素氮與銨態(tài)氮總量及分別濃度，既能對人為添加的尿素、硫酸銨等進行測定，也可以檢測牛奶中含有的內源尿素氮(MUN)。反應中牛奶樣品的前處理采用TCA沉淀法，該過程在脲酶處理之進行。方法在不同樣品、不同測定時間、不同操作人員間的重復性好，乳中可能同時存在的疊氮化鈉、碳酸氫鈉、硫酸鈉、蔗糖、葡萄糖和氯化鈉等不會對測定結果產生干擾，超過一定