多酚氧化酶特異性卵黃抗體的制備及其抑制蝦類(lèi)黑變效果研究.pdf

1、由多酚氧化酶導(dǎo)致的蝦體黑變是蝦類(lèi)產(chǎn)品加工過(guò)程中影響產(chǎn)品感官質(zhì)量和商品價(jià)值的重要因素之一，針對(duì)多酚氧化酶活性的抑制，研究開(kāi)發(fā)安全、高效的生物材料應(yīng)用于蝦類(lèi)黑變控制是目前研究的熱點(diǎn)。卵黃抗體（IgY）作為禽類(lèi)血清中IgG轉(zhuǎn)移到卵黃中形成的唯一一類(lèi)免疫球蛋白，其與抗原結(jié)合后可顯著影響抗原物質(zhì)的活性，可作為一種潛在的新型生物保鮮劑。
　　本研究以南美白對(duì)蝦作為研究對(duì)象，以提取純化的南美白對(duì)蝦體內(nèi)的多酚氧化酶作為抗原免疫蛋雞，制備特異性卵黃

2、抗體，研究卵黃抗體對(duì)多酚氧化酶活性的抑制效應(yīng)，并以南美白對(duì)蝦為實(shí)驗(yàn)樣本驗(yàn)證卵黃抗體抑制蝦體黑變效果，綜合感官評(píng)定、TVB-N含量、pH值及微生物指標(biāo)，評(píng)價(jià)卵黃抗體的保鮮性能。研究的主要結(jié)果如下：
　　利用丙酮沉淀純化，Sephadex G-100凝膠層析，DEAE Sephadex A-50離子交換層析對(duì)南美白對(duì)蝦體內(nèi)多酚氧化酶進(jìn)行分離純化，并利用SDS-PAGE凝膠電泳對(duì)純化后的多酚氧化酶純度進(jìn)行鑒定。經(jīng)測(cè)定，粗酶液酶活為0.4

3、5 U/mg，總蛋白量為10940.2 mg，經(jīng)三步純化，多酚氧化酶酶活為14.4 U/mg，純化倍數(shù)為32倍，蛋白回收率為1.19％，活力回收率為38%。經(jīng)SDS-PAGE電泳鑒定，純酶分子量約為45 kD，純度達(dá)到電泳級(jí)。
　　以純化后的多酚氧化酶為抗原免疫蛋雞，提取制備蛋黃中的IgY，并對(duì)其免疫活性進(jìn)行測(cè)定。經(jīng)三次注射免疫后，卵黃中的IgY的效價(jià)可達(dá)到1:2000左右，并可維持較長(zhǎng)時(shí)間； IgY具有較好的理化穩(wěn)定性，在35-

4、60℃免疫活性可保持在90%左右，在pH5~9時(shí)其活性保持在50%以上。
　　特異性IgY對(duì)多酚氧化酶活性具有顯著的抑制效應(yīng)，且抑制效應(yīng)與 IgY濃度呈正相關(guān)，IgY濃度越大，抑制效果越明顯。在0℃與37℃下，0.5 mg/mL的特異性 IgY即可顯現(xiàn)抑制效果，作用時(shí)間為1 min時(shí)，多酚氧化酶活性已降低30%，隨著IgY濃度的增加，酶活抑制效果也逐漸增大，當(dāng)IgY濃度達(dá)到5 mg/mL時(shí)，酶活性可降低80%。
　　實(shí)際樣本