膠紅酵母產(chǎn)角質(zhì)酶的研究及應(yīng)用.pdf

1、杜仲(Eucommia ulmoides Oliv)是中國(guó)特有的中藥材和工業(yè)原料植物，研究發(fā)現(xiàn)杜仲皮和杜仲葉中含有大量的藥用成分，能治愈多種疾病。因此其在天然藥物領(lǐng)域內(nèi)研究十分活躍，其綜合開(kāi)發(fā)利用的前景更是十分廣闊。
　　隨著生物酶研究的不斷深入，應(yīng)用領(lǐng)域的發(fā)展，利用酶工程技術(shù)來(lái)提取杜仲中的天然成分的方法得到越來(lái)越多研究者的認(rèn)同。在研究植物病菌致病機(jī)理時(shí)，發(fā)現(xiàn)其產(chǎn)生的角質(zhì)酶可以破壞寄主植物中的角質(zhì)層。因此，本課題組有針對(duì)性的選育了

2、能有效降解杜仲葉表面角質(zhì)層的菌株，經(jīng)鑒定為膠紅酵母(Rhodotorula mucilaginosa)。
　　在對(duì)膠紅酵母的生長(zhǎng)特性有所了解后，開(kāi)始誘導(dǎo)膠紅酵母發(fā)酵產(chǎn)角質(zhì)酶的研究。據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，一般所采用的誘導(dǎo)劑為植物角質(zhì)，而角質(zhì)制作工藝復(fù)雜，對(duì)角質(zhì)酶的大規(guī)模應(yīng)用構(gòu)成了限制，所以，尋找可替代角質(zhì)的誘導(dǎo)物勢(shì)在必行。在進(jìn)行多次試驗(yàn)后發(fā)現(xiàn)，使用亞麻油做誘導(dǎo)劑效果較好，且亞麻油廉價(jià)易得，大大減少了生產(chǎn)成本及工作量，提高了研究效率。為了更好的

3、將此法應(yīng)用到生產(chǎn)實(shí)踐中，本文主要做了以下工作：
　　1.對(duì)橄欖油、菜籽油、亞麻油和角質(zhì)的誘導(dǎo)效果進(jìn)行對(duì)比，通過(guò)測(cè)定酶活性篩選合適的誘導(dǎo)物高效誘導(dǎo)產(chǎn)酶。對(duì)比發(fā)現(xiàn)，亞麻油為誘導(dǎo)物時(shí)酶活性高于其他誘導(dǎo)物，是未加誘導(dǎo)劑時(shí)酶活的1.5倍。因此，以亞麻油為誘導(dǎo)物繼續(xù)對(duì)誘導(dǎo)的發(fā)酵條件進(jìn)行了詳細(xì)的研究，設(shè)計(jì)單因素實(shí)驗(yàn)對(duì)培養(yǎng)基條件和環(huán)境因素進(jìn)行探索，最終通過(guò)正交實(shí)驗(yàn)確定了誘導(dǎo)發(fā)酵產(chǎn)酶的工藝參數(shù)，在此條件下，酶活性比優(yōu)化前提高了近5倍。
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4、.研究了膠紅酵母角質(zhì)酶的酶學(xué)性質(zhì)。主要包括角質(zhì)酶的最佳反應(yīng)溫度，熱穩(wěn)定性，最佳pH，pH穩(wěn)定性，以及一些常見(jiàn)金屬離子對(duì)角質(zhì)酶活性的影響。
　　3.杜仲葉的聯(lián)合酶解。利用角質(zhì)酶與蛋白酶、果膠酶、纖維素酶聯(lián)合提取杜仲葉中的天然成分。在經(jīng)上述四種酶依次處理后，將各步得到的酶解液分別收集，經(jīng)過(guò)濾、濃縮、乙醇提取，最后負(fù)載至β-環(huán)糊精上，制成杜仲原粉。用高效液相色譜法對(duì)杜仲原粉中的綠原酸進(jìn)行了分析測(cè)定，確定了檢測(cè)方法，并證實(shí)經(jīng)角質(zhì)酶處理后所