白介素13與白喉毒素融合蛋白靶向治療活性相關(guān)的研究.pdf

1、白喉毒素是白喉?xiàng)U菌產(chǎn)生的細(xì)菌外毒素，1-2個(gè)分子就可以殺滅一個(gè)細(xì)胞。IL-13是一種由活化T細(xì)胞產(chǎn)生的細(xì)胞因子，受體有IL-13Rα1和IL-13Rα2，IL-13Rα2單體形式對(duì)IL-13有高親和力，被認(rèn)為是腫瘤特異且高親和的靶點(diǎn)。 本實(shí)驗(yàn)通過(guò)誘導(dǎo)已構(gòu)建的質(zhì)粒大腸桿菌，表達(dá)并獲得IL-13與白喉毒素融合蛋白DT389-hIL13-13E13K。分別通過(guò)稀釋復(fù)性和柱上復(fù)性兩種方法提純后，通過(guò)體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)研究了該融合蛋白對(duì)腦膠質(zhì)瘤的

2、靶向殺傷活性。在體外實(shí)驗(yàn)中，選取了融合蛋白的7個(gè)濃度組(10-7M、5×10-8M、10-8M、5×10-9M、10-9M、5×10-10M、10-10M、10-11M中的七個(gè))、三個(gè)時(shí)間點(diǎn)(24、48、72小時(shí))檢測(cè)融合蛋白DT389-hIL，13-13E13K對(duì)腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞的殺傷活性。在體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中，將腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞系U87注于小鼠背部皮下建立腫瘤模型，選取30μg/kg、100μg/kg、300μg/kg、1000μg/kg四種給藥濃

3、度，通過(guò)瘤內(nèi)注射的方法，每隔一天注射一次，共連續(xù)注射5次，觀察融合蛋白DT389-hIL13-13E13K的體內(nèi)腫瘤殺傷活性。同時(shí)，本實(shí)驗(yàn)用RNA干擾的方法，初步探討了IL-13Rα2在融合蛋白DT389-hIL13-13E13K腫瘤治療中的作用。結(jié)果顯示，所得融合蛋白濃度純度達(dá)到95％以上。在體外活性實(shí)驗(yàn)中，稀釋復(fù)性和柱上復(fù)性兩種純化方法獲得的融合蛋白DT389-hIL13-13E13K對(duì)腦膠質(zhì)瘤均有很好的殺傷效果，半數(shù)致死濃度分別達(dá)

4、到6×10-10M和1×10-8M，其中稀釋復(fù)性的方法純化的融合蛋白殺傷效果達(dá)到了國(guó)際水平。體內(nèi)活性測(cè)定結(jié)果顯示，融合蛋白DT389-hIL13-13E13K對(duì)腦膠質(zhì)瘤有一定的抑制作用，但效果并未達(dá)到使腫瘤完全消退的水平。同時(shí)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，IL-13Rα2被干擾的腫瘤細(xì)胞系對(duì)融合蛋白DT389-hIL13-13E13K的敏感性下降，這說(shuō)明該融合蛋白是通過(guò)IL-13Rα2介導(dǎo)抑制腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)。另外，實(shí)驗(yàn)也發(fā)現(xiàn)了一些國(guó)內(nèi)外尚未報(bào)道的高表