超分子組裝構(gòu)建具有磁響應(yīng)性的高分子基因載體.pdf

1、現(xiàn)如今，納米材料已逐漸被運(yùn)用到細(xì)胞生物學(xué)和分子生物學(xué)等研究領(lǐng)域，為促進(jìn)生物醫(yī)學(xué)的研究和發(fā)展提供了一種新的技術(shù)和手段。超順磁性Fe3O4納米顆粒因?yàn)榫邆湟字苽?、粒徑小、單分散性和磁靶向等?yōu)良性質(zhì)，已在生物醫(yī)學(xué)方面獲得廣泛的關(guān)注與研究。不久之前，美國(guó)食品和藥物監(jiān)督管理局(FDA)已成功批準(zhǔn)磁性Fe3O4納米顆?？杀粦?yīng)用到疾病成像上。最近幾年的文獻(xiàn)報(bào)道，在多種治療藥物和治療基因的主動(dòng)靶向上超順磁性Fe3O4納米粒子有著非常廣泛的應(yīng)用實(shí)例。研究

2、證實(shí)，超順磁性Fe3O4能夠被運(yùn)用在藥物或者基因載體系統(tǒng)中，如果藥物或者基因載體系統(tǒng)在外加磁場(chǎng)的作用下，可促進(jìn)其快速到達(dá)靶向的治療位置。所以我們采用有超順磁性的Fe3O4納米材料來(lái)運(yùn)載腫瘤藥物和治療基因擁有巨大的研究?jī)r(jià)值。
　　以上述研究背景及發(fā)展趨勢(shì)為基礎(chǔ)，在本論文中，我們通過(guò)新一代的超分子自組裝的方式將修飾有低代聚酰胺-胺型樹(shù)枝狀大分子(PAMAMG1和G2)的β-環(huán)糊精(β-CD)通過(guò)主客體相互作用的方式組裝在超順磁性Fe3

3、O4納米顆粒上，構(gòu)建了一種具有磁靶向性的新型高分子基因載體，并對(duì)其生物相容性和轉(zhuǎn)基因的性能進(jìn)行了測(cè)定，本論文主要從以下兩個(gè)部分展開(kāi):
　?。ㄒ唬┚哂辛己么虐邢蚨ㄎ坏纳锟山到饩酆衔颬AMAM-CD-MNP的合成及表征:
　　將G1及G2 PAMAM連接在β-CD的6位上，通過(guò)核磁共振(NMR)的方法來(lái)確定其化學(xué)結(jié)構(gòu);再制備一批流體動(dòng)力學(xué)粒徑在10nm左右的油酸磁球，采用動(dòng)態(tài)光散射法(DLS)、透射電鏡(TEM)、傅里葉紅外光

4、譜儀(FITR)等表征方法來(lái)對(duì)其形貌和結(jié)構(gòu)進(jìn)行鑒定，通過(guò)相轉(zhuǎn)移的方法讓PAMAM-CD與磁性納米顆粒進(jìn)行偶聯(lián)，并對(duì)偶聯(lián)成功的產(chǎn)物進(jìn)行物理和化學(xué)的表征，如DLS、TEM、熱失重分析等表征，然后利用戊二醛對(duì)其結(jié)構(gòu)進(jìn)行交聯(lián)定型，再次通過(guò)DLS、TEM鑒定其組裝結(jié)構(gòu)，最終我們得到了流體動(dòng)力學(xué)粒徑為307.9nm±2.2nm的超分子組裝體PAMAM-CD-MNP。
　?。ǘ㏄AMAM-CD-MNP介導(dǎo)pEGFP-N1轉(zhuǎn)基因性能的評(píng)價(jià):

5、r>　　我們以NIH3T3細(xì)胞為研究模型，首先通過(guò)MTT法測(cè)定其細(xì)胞毒性，結(jié)果表明，我們的材料在達(dá)到120μ g/mL濃度時(shí)細(xì)胞的存活率還都在80％以上，這樣的結(jié)果顯示出我們的材料擁有較好的生物相容性;轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)表明，在磁場(chǎng)的作用下，我們的材料具有良好的轉(zhuǎn)染性能，對(duì)Hela細(xì)胞的最高轉(zhuǎn)染效率能達(dá)到42％，高于無(wú)磁場(chǎng)的或低代PAMAM。
　　綜上所述，我們的材料PAMAM-CD-MNP具有良好的生物相容性和較高的轉(zhuǎn)染性能，因此在解決生