蝦過敏原提取物量效關(guān)系的表征.pdf

1、蝦是主要的經(jīng)濟甲殼類動物，也是經(jīng)常報道的引起過敏反應(yīng)的食用海產(chǎn)品之一。在蝦過敏癥的診斷和治療過程中，對于蝦過敏原提取物的制備、蝦品種的選擇以及蝦過敏原提取物的貯存、量化等都尤為重要。本論文旨在建立蝦過敏原的提取程序；對蝦參考物進行選擇；探討儲存時間和溫度及凍融循環(huán)過程中蝦過敏原提取物免疫原性變化以及解訣方法；最后確立蝦過敏原提取物活性的定量、定效、定性的表征方法。主要的結(jié)論如下：
　　 1、蝦過敏原提取物抽提方法的研究采用七種不

2、同的過敏原抽提液，對南美白對蝦(Penaeus vannamei)的丙酮粉進行抽提，結(jié)果表明，加入DTT的1M KCI溶液提取的蝦蛋白提取的蛋白濃度為12.35mg/mL；抽提出蛋白的條帶有15條，并包括主要過敏原和次要過敏原；并且其與IgG結(jié)合的能力比純水的高57.27％。因此，加入DTT的1MKCl溶液可以用于蝦過敏原提取物的準備。
　　 2、不同蝦類過敏原提取物免疫原性的研究選取不同的蝦品種，對其抽提物的蛋白組成和免疫活性

3、進行比較。發(fā)現(xiàn)南美白對蝦的過敏原提取物中有15條蛋白條帶，且與10位患者血清反應(yīng)的免疫條帶一共有43條；與其他蝦品種的交叉反應(yīng)率最高可達到87.78％。因此，確定南美白對蝦是免疫活性最強且包含全部已報道致敏蛋白的品種，可作為過敏原蛋白的規(guī)范化參考物。
　　 3、儲存過程中蝦過敏原提取物活性變化的研究選取南美白對蝦為研究對象，通過測定五周內(nèi)蛋白的濃度變化、蛋白組成以及活性比較，來探討過敏原提取物的最佳儲存條件。實驗結(jié)果表明，蝦過敏

4、原提取物在-20℃和-80℃儲存五周時，主要過敏原條帶不會發(fā)生降解；提取物的過敏活性保持不變；且蛋白濃度僅分別下降5.71％和5.00％。
　　 4、凍融循環(huán)過程中蝦過敏原提取物活性變化的研究采用南美白對蝦為研究對象，通過對比不同溫度不伺凍融次數(shù)下的蛋白濃度、組成以及活性變化，發(fā)現(xiàn)凍融循環(huán)五次時，-3℃，-20℃，-80℃的蛋白濃度分別降低24.21％、30.03％和33.08％；-80℃和-20℃的過敏原凍融循環(huán)三次時產(chǎn)生新的

5、56KDa的蛋白條帶，而-3℃凍融循環(huán)四次時才產(chǎn)生這條新的蛋白條帶；且在-3℃，-20℃，-80℃凍融循環(huán)五次時，其活性分別下降52.37％、66.09％和21.31％。因此，提出過敏原檢測試劑在應(yīng)用時，應(yīng)盡量減少凍融次數(shù)以確保實驗結(jié)果的準確性。
　　 5、抗凍劑的使用對蝦過敏原提取物耐儲性的影響抗凍劑的使用對蛋白的濃度、組成和活性的保持均具有明顯作用，且蔗糖和海藻糖的效果好于甘油，蔗糖和海藻糖的濃度在10％和20％時都能維持較

6、好的效果。且在-20℃、-40℃和-80℃儲存時添加抗凍劑，要比室溫和0℃時添加的效果好。
　　 6、抗酶解能力表征蝦過敏原提取物的研究以不同蝦品種的過敏原提取物和不同提取液抽提的蝦過敏原抽提物為研究對象，通過對比胃蛋白酶酶解前后蝦過敏原抽提物的活性以及抗酶解的時間，得出蛋白提取物的抗酶解能力與蛋白跟IgE抗體結(jié)合的能力不相關(guān)的結(jié)論，即抗酶解能力的測定表征過敏原的活性不可行。
　　 7、RBL-2H3細胞釋放β-己糖胺酶

7、表征蝦過敏原提取物活性的研究10 ng/mL的蛋白提取物的濃度是激發(fā)細胞產(chǎn)生β-己糖胺酶的最佳濃度。不同蝦品種過敏原提取物，激發(fā)RBL-2H3細胞產(chǎn)生β-己糖胺酶的量不相同，蛋白提取物激發(fā)細胞釋放β-己糖胺酶的量和β-己糖胺酶釋放率之間存在著線性關(guān)系，并確定南美白對蝦的過敏原提取物的活性為6.09。
　　 本文通過蝦過敏原提取物的定量、定效和定性研究，確立了過敏原提取物的提取及使用程序，建立了過敏原提取物的活性表征方法，為過敏原