煙草吡哆胺-丙酮酸轉(zhuǎn)氨酶的部分純化與表征.pdf

1、維生素B6(VB6)是一類吡啶化合物的總稱，游離型為吡哆醇(Pyridoxine，PN)、吡哆胺(Pyridoxamine，PM)和吡哆醛(Pyridoxal，PL)，三者相應(yīng)磷酸酯形式為磷酸吡哆醇(Pyridoxine-5’-phosphate，PNP)、磷酸吡哆胺(Pyridoxamine-5’-phosphate，PMP)和磷酸吡哆醛(Pyridoxal-5’-phosphate，PLP)。其中PLP是VB6的主要輔酶形式，參與氨

2、基酸的各種代謝反應(yīng)與多種物質(zhì)的代謝。煙草作為一種模式植物，也成為VB6研究的實驗材料，研究發(fā)現(xiàn)PLP、PL和PN是煙草VB6的主要存在型，煙草VB6還與植物抗逆性有關(guān)。吡哆胺-丙酮酸轉(zhuǎn)氨酶(EC2.6.1.30，Pyridoxamine-pyruvateaminotransferase，簡稱PPAT)以PM和丙酮酸為底物生成PL和L-丙氨酸，PPAT涉及到VB6降解途徑，對研究VB6代謝具有重要意義。雖然細(xì)菌體內(nèi)PPAT已有廣泛的研究，

3、但是植物體內(nèi)PPAT的研究則尚未見報道。煙草是重要的經(jīng)濟(jì)作物之一，本文以煙草為研究對象，提取并分析PPAT酶學(xué)性質(zhì)，為深入研究PPAT的催化機(jī)制建立了基礎(chǔ)。
　　 本文通過冷凍干燥、DEAE-SepharoseFastFlow陰離子交換柱層析、SephadexG-100凝膠過濾柱層析，SP葡聚糖凝膠C-25陽離子交換柱層析等分離純化技術(shù)，對煙草PPAT進(jìn)行分離純化，并對其基本酶學(xué)性質(zhì)進(jìn)行分析。研究結(jié)果表明：該酶被純化了92.34