應(yīng)用基因組改組技術(shù)選育真菌α-淀粉酶高產(chǎn)菌株.pdf

1、以實(shí)驗(yàn)室保藏的米曲霉FS-16為原始出發(fā)菌株,通過(guò)傳統(tǒng)誘變方法構(gòu)建正突變庫(kù)。通過(guò)致死曲線的測(cè)定,確定紫外誘變照射劑量為160s,微波誘變輻射劑量為25s。出發(fā)菌株分別經(jīng)紫外誘變、微波誘變,采用淀粉平板透明圈初篩、液體發(fā)酵復(fù)篩,最終從2000多個(gè)突變株中篩選到α-淀粉酶產(chǎn)量較高穩(wěn)定性較好的突變株FU-8、FU-26、FW-111及FW—130。
　　 通過(guò)單因素實(shí)驗(yàn)獲得米曲霉原生質(zhì)體制備和再生的最佳條件:菌齡15h,酶解溫度28℃

2、、裂解時(shí)間2.5h、0.6mol/L NaCl作為滲透壓穩(wěn)定劑,含0.6mol/L NaCl的PDA培養(yǎng)基為再生培養(yǎng)基。通過(guò)響應(yīng)面分析法對(duì)破壁酶系統(tǒng)進(jìn)行研究,獲得最佳酶系組成為:蝸牛酶0.8％、纖維素酶0.8％、溶菌酶0.5％。
　　 通過(guò)米曲霉原生質(zhì)體滅活實(shí)驗(yàn)得出,用紫外線處理180S或熱處理12min,米曲霉原生質(zhì)體即可達(dá)到100％滅活:原生質(zhì)體融合條件研究表明最適融合條件為:PEG30％,Ca2+0.02mol/L,融合時(shí)

3、間10min,融合溫度30℃。以原始菌株FS-16和誘變篩選出的突變株FU-8、FU-26、FW-111及FW-130作為親本,采用基因組改組技術(shù),經(jīng)過(guò)三輪遞推式融合后篩選得到一株能夠穩(wěn)定遺傳的改組菌株F3—542,其酶活較原始菌株提高了61.5％,發(fā)酵周期也相對(duì)縮短了24h,達(dá)到了選育高產(chǎn)菌株的目的。
　　 對(duì)改組菌株F3—542的發(fā)酵條件進(jìn)行優(yōu)化,首先通過(guò)單因素實(shí)驗(yàn)可知最佳碳源為玉米粉,最佳有機(jī)氮源為牛肉膏,最佳無(wú)機(jī)氮源為硝