大米多肽的分離純化及其抗氧化活性的研究.pdf

1、酶法分離提取大米多肽和淀粉的反應(yīng)條件溫和，工藝簡(jiǎn)單，提取所得大米淀粉的品質(zhì)高于堿法提取所得淀粉的品質(zhì)。作為大米淀粉的副產(chǎn)物，大米多肽具有一些生理活性，如降膽固醇及抗氧化活性等。但在大米蛋白水解液中，因可溶性糖的溶出，影響了大米多肽的品質(zhì)及生產(chǎn)工藝。本文以大米為對(duì)象，采用酶法同時(shí)分離大米蛋白和淀粉，在獲得高品質(zhì)淀粉的同時(shí)得到具有生物活性的大米多肽，重點(diǎn)對(duì)大米多肽進(jìn)行了除糖、降膽固醇活性和抗氧化活性的研究，并最終對(duì)分離得到的單一具有高活性的

2、肽的氨基酸序列進(jìn)行了鑒定。 首先在確定大米蛋白水解液中存在的糖主要來(lái)源于水解進(jìn)程的基礎(chǔ)上，以ProteaseN水解大米所得水解液作為研究對(duì)象，通過(guò)分析水解液中多肽與糖的相對(duì)分子量分布及組成，確定利用以D201強(qiáng)陰離子交換樹(shù)脂為載體進(jìn)行大米多肽與糖的分離?？疾炝穗x子交換工藝參數(shù)對(duì)大米蛋白回收率和脫糖率的影響，得到最佳的離子交換條件為：使用磷酸鹽緩沖液(pH7.0，離子強(qiáng)度為0.01mol/L)作為起始緩沖液平衡樹(shù)脂。平衡后，將硼砂

3、與糖按1:8的摩爾比混合均勻后上樣，上樣體積與樹(shù)脂的體積比為1:1。對(duì)吸附在樹(shù)脂上的大米多肽進(jìn)行洗脫，洗脫時(shí)采用二次洗脫，先用水洗脫(1倍體積)，后用0.1mol/LHC1洗脫(2倍體積)。收集未吸附液及洗脫液，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)后冷凍干燥。最終蛋白回收率為98.2％，脫糖率為84.3％。冷凍干燥后樣品的干基蛋白含量為80.0％，干基糖含量為9.0％。 比較了ProteaseN和Alcalase水解所得粳米肽和糯米肽的降膽固醇活性及抗氧化

4、活性。結(jié)果表明，ProteaseN水解所得粳米肽和Alcalase水解所得粳米肽的降膽固醇活性較高，兩者的活性接近，濃度為7.5mg/mL時(shí)其降膽固醇活性為38％左右，但均低于大豆肽的降膽固醇活性(44.60％)；抗氧化活性主要研究了.DPPH、和O2這三種自由基的清除率。結(jié)果表明，ProteaseN水解所得粳米肽的抗氧化活性最好，清除DPPH的IC50值為7.5mg/mL，清除OH的IC50為12.6mg/mL，清除O-2的IC50為

5、24.7mg/mL。 利用RP-HPLC分離純化了ProteaseN水解所得粳米肽，經(jīng)過(guò)制備型RP-HPLC分離后主要得到14個(gè)峰，組分6具有最高的DPPH清除率(IC50為32.6ug/mL)，組分2具有最高的OH清除率(蛋白濃度為35ug/mL時(shí)清除率為66.2％)，組分4具有最高的O2清除率(蛋白濃度為35ug/mL時(shí)清除率為39.5％)。通過(guò)LC-MS對(duì)這三個(gè)組分進(jìn)行結(jié)構(gòu)鑒定，組分2的肽序列可能為VAK/AKV、AAAA